利用噬菌体展示技术鉴定vvibdv抗原表位及多表位模拟蛋白表达.pdf

山东农业大学
硕士学位论文
利用噬菌体展示技术鉴定vvIBDV抗原表位及多表位模拟蛋白表
达
姓名:王小娥
申请学位级别:硕士
专业:预防兽医学
指导教师:朱瑞良
20080612
中文摘要本研究共分两个部分:一、四株タ沟目乖砦坏募ê托蛄蟹治蛋白质抗原性的物质基础。用于正确而详细地绘制抗原表位图谱对疾病地诊断、设计无毒副作用地多表位疫苗以及免疫治疗试剂等具有积极的意义。因此目前在预防医学领域许多关于以表位为基础的,如表位疫苗和特异性诊断试剂等的研究也就成了热点。而噬菌体展示技术作为近年来新兴物地抗原表位。这就为揭示一些病原体未知地抗原表位,从而进一步达到病毒是危害世界养禽业的主要传染病之一。主要侵害雏鸡的中枢免疫器官——法氏囊,导致免疫抑制。且对其他疫病的易感性增强,饲养成本增加的同时导致药物残留,危害人类健康,造成经济损失。近年来,病病毒的免疫机理、致病机制、病毒分子结构与功能方面仍然有许多问题互作用的本质,从而了解的致病机制和免疫机理。为研究的免疫机理和致病机理,利用闕タ寺】体、和—魑I秆》肿樱允删逭故目饨帧拔揭幌赐岩焕┰觥碧韵矗用恐甑タ寺】固迳秆〉降氖删咧兴婊挑取个单克隆蓝色噬菌斑,合计个,通过间接觳猓值均大于畂揖笥谝跣远哉誂档倍;竞争抑制治觯单克隆抗体和抗原均能竞争抑制筛选肽与固相包被单克隆抗体抗原表位,又称抗原决定簇,是抗原分子抗原性的基础。抗原表位是起的研究蛋白质抗原表位的有利工具,已经成功地鉴定出了多种病原微生预防和控制疾病地发生提供了条件。传染性法氏囊病琁怯纱拘苑ㄊ夏也琁引起的一种急性接触性传染病,分子生物学研究虽然己取得了较大进展,↖乖砦挥兄诮沂静《居牖逑山东农业大学硕士学位论文,
二、多表位模拟肽串联基因的表达与免疫原性分析的反应,抑制率大于%,表明在该肽内含有抗原表位。选取个单克隆噬菌斑个单克隆噬菌斑×甑タ寺】固,经噬菌体部分基因的核苷酸序列测定,确定了鲇攀奈2煌琁乖位,这脑谝患督峁股厦挥个以上连续氨基酸与陌被嵝蛄邢嗤Γ撇饪赡苁枪瓜笠览敌员砦弧为研制抗原表位疫苗奠定基础,本研究利用甏拘苑ㄊ夏也〔《单克隆抗体邮删逅婊目庵械玫搅个含有不同乖砦坏哪D怆男蛄小T诖嘶∩希个抗原表位用四肽连接构建多表位基因=ǜ没蚝铣伞⒖寺『螅菇ㄔ吮泶质粒诖蟪Ω司斜泶镏刈槎啾砦坏鞍譺甈挤治觯瑀逭甲艿鞍椎ァ⒎肿恿。用的单克隆抗体和多克隆抗体对进行免疫印迹对比分析,结果表明,具有特异性和免疫反应性。将经皮下注射免疫兔,第一次免疫后抗体效价为,第二次免疫罂固逍Ъ凵叩:剑得鱮捎盏蓟宀鶬匾煨钥固濉S胷用庖咦剂经肌肉注射免疫鸡,免疫魏螅G蹇固逍Ъ劭纱锏:个超强毒株セ魇笛榧Γ瑀庖咦槿ú看婊埃而单用佐剂对照组的死亡率为%,证明可诱导机体产生抗感染的保护性免疫应答,预示构建的勺魑狪多表位疫苗研究的候选基因。关键词:噬菌体展示;抗原表位:;单克隆抗体;免疫原性利用噬菌体展示技术鉴定抗原表位及多表位模拟蛋白表达
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符号及缩略词英文全称汉语名称开放阅读框多聚蛋白无特定病原单克隆抗体脱氧核苷三磷酸鸡胚半数致死量异丙基硫代半乳糖苷英文缩写心传染性法氏囊病传染性法氏囊病病毒超强毒非编码区病毒蛋白聚合酶链式反应核糖核酸酶蚀斑形成单位磷酸盐缓冲液氨苄青霉素牛血清白蛋白酶联免疫吸附测定郾0纺旱缬猼—Ⅱ/坞猤踥産—
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言引拘苑ㄊ夏也〉母攀在抗原分子表面具有特殊立体结构和免疫活性的化学基团称为抗原,由于抗原决定簇通常位于抗原分子的表面,因而又称为抗原表位戴和平等,蔷哂写碳せ宀体或致敏淋巴细胞并能够与抗体或细胞识别的部位。正确而详细地绘制抗原表位图谱对疾病的诊断、定点改造蛋白质分子以降低蛋白质药物的免疫原性,设计无毒副作用的人工疫苗以及免疫治疗剂等有重要的意义。例如,基于多个表位的疫苗可以避免由于病毒的变