脯氨酸含量的测定.docx

脯氨酸含量的测定
脯氨酸含量的测定
脯氨酸含量的测定
脯氨酸含量的测定
在逆境条件下， 植物体内脯氨酸 （ proline ，Pro）的含量显著增加。 植物体内脯氨酸含量
在一定程度上反映了植物的抗逆性， 抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。 因此测定脯氨
酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。 另外，由于脯氨酸亲水性极强， 能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程， 因而能降低凝固点， 有防止细胞脱水的作用。 在低温条件下， 植物组织中脯氨酸含量增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。
一、原理
当用磺基水杨酸提取植物样品时， 脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中， 然后用酸性茚
三***加热处理后，溶液即为红色，再用甲苯处理， 则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在 520nm 波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料
待测植物叶片
（二）仪器设备
722 型分光光度计；
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小烧杯；
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（三）试剂
***溶液：将 茚三***溶于 30ml 冰醋酸和 20ml 6mol/l 磷酸中，搅拌加热
（70℃）溶解，贮于冰箱中。
2. 3%磺基水杨酸： 3g 磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至 100ml 。
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三、实验步骤

（ 1）在分析天平上精确称取 25mg 脯氨酸，倒入小烧杯中内，用少量蒸馏水溶解，然
后倒入 250ml 容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每毫升含脯氨酸 100ug。
（ 2）系列脯氨酸浓度的配置： 取 6 个 50ml 容量瓶，分别加入脯氨酸原液 、 、
、、 及 ，用蒸馏水定容至刻度， 摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为 1ug/ml 、
2ug/ml 、 3ug/ml 、 4ug/ml 、5ug/ml 及 6ug/ml 。
（ 3）取 6 支试管，分别吸取 2ml 系列标准浓度的脯氨酸溶液及 2ml 冰醋酸和 2ml 酸性
茚三***溶液，每管在沸水浴中加热 30min 。
（ 4）冷却后各试管准确加入 4ml 甲苯，振荡 30s，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶
液。
脯氨酸含量的测定
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（ 5）用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，
于 520nm 波长处进行比色。
（ 6）标准曲线的绘制：先求出吸光度值（ Y）依脯氨酸浓度（
再按回归方程式绘制标准曲线，计算 2ml 测定液中脯氨酸的含量（

以甲苯溶液为空白对照，
X）而变的回归方程式，
ug/2ml ）。
脯氨酸