实验2 3,5-二硝基水杨酸比色法还原糖含量的测定.ppt

植物组织中还原糖含量的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法)
实验2
实验类型：基础验证型
实验学时：3学时
实验目的
掌握和学****3,5-二硝基水杨酸比色法还原糖含量的测定的基本方法,分光光度计的使用、标准曲线的制作。
1 原理
3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖（各种单糖和麦芽糖）溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和棕红色物的颜色深浅呈一定比例关系。在540nm波长下测定棕红色物质的消光度值，查标准曲线，便可求出样品中还原糖的含量。
黄色
桔红色
+ 糖酸
加热
碱性
2 试剂、材料与设备
　主要试剂
1mg/mL葡萄糖标准液：
准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，转移到100mL的容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀，4℃冰箱中保存备用。
3,5-二硝基水杨酸试剂：
3,5-二硝基水杨酸和262mL 2mol/L NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
　材料:玉米粉
25ml刻度试管；大离心管；100mL烧杯；100mL三角瓶；100mL容量瓶 ；刻度吸管 1mL、2mL、10mL；
　主要设备
分光光度计
离心机
水浴锅
电子天平
制作葡萄糖标准曲线
取7支具有25mL刻度试管，编号，按表准确加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液和3,5-二硝基水杨酸试剂。
3 实验方法
管号
0
1
2
3
4
5
6
葡萄糖标准液(ml)
0






蒸馏水（ml）







3,5-二硝基水杨酸试剂（ml）







相当葡萄糖量(mg)
0






将各管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，，混匀。在540nm波长下，用0号管调零，分别读取1～6号管的吸光度值。以吸光度为纵坐标，葡萄糖mg为横坐标，绘制标准曲线。
样品中还原糖的测定
样品中还原糖的提取
玉米粉2g
蒸馏水
5mL
研磨
转移
50℃保温20min
100mL烧杯
水浴锅
100mL容量瓶
离心机
4000r/min离心15min
烧杯
收集上清液备用