实验1大肠杆菌的培养与分离.doc

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. v 右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿翻开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。
倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基外表。向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。否那么，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿培养基。
〔2〕接种
微生物接种的最常用方法是平板划线法和稀释涂布法。
平板划线法〔方法简单，考试的主要考察点〕：通过接种环在琼脂固体培养基外表连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基外表〔也是别离纯化的方法〕。在第一次划线后都从上次划线末端开场的目的是获得由单个细菌形成的标准菌落。
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稀释涂布平板法〔操作复杂，单菌落更易分开〕：将菌液进展一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进展培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。
1．划线别离法：用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少。划线到最后，可使细菌间的距离加大。在培养10～20h后，可由一个细菌产生单菌落，菌落不会重叠。如果再将每个菌落分别接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，那么每个斜面的菌群就是由一个细菌产生的后代。
其操作步骤是：将培养皿底部用拇指和无名指固定成倾斜状态，在火焰旁将培养皿稍微翻开。在此同时，用环状接种针在火焰旁取少许菌悬液，迅速送入培养皿，在平板培养基的一边，作第1次平行划线 3～5条，转动培养皿约70°角，用烧过冷却的接种针，通过第1次划线局部作第2次平行划线，然后再用同样方法，通过第二次平行划线局部作第三次平行划线和通过第三次平行划线局部作第四次平行划线。
划线时，接种针应与平板外表成30°角左右。不要使接种针碰到培养皿边缘，也不要将培养基划破。划线完毕后，盖上皿盖，倒置于恒温箱培养。
取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进展，其目的是防止高温杀死菌种；最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。
2．涂布别离法：先将培养的菌液稀释，通常稀释到10－5 ～10－7之间，，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进展培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。通常每个培养皿有20个以的单菌落最为适合。将每个菌落分别接种在斜面上扩增培养后，再做功能性实验。
〔3〕培养
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