实验1大肠杆菌的培养与分离.ppt

实验目的:
，利用液体培养基进行细菌培养的操作
,用固体平板培养基进行细菌的划线培养

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特点：结构都相当简单,个体
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
思考
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实验用具
LB固体培养基
大肠杆菌菌液（LB液体培养基）
培养皿
接种环
酒精棉
酒精灯
镊子、火柴、记号笔
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配制培养基
包器材
灭菌
菌种扩增
倒平板
接种、划线
培养
观察记录
实验流程
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二、大肠杆菌的培养和分离实验操作
（一）培养基的配置与灭菌
取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压锅灭菌15min。
LB液体培养基——细菌的扩大培养
LB固体培养基——细菌的划线分离
封口膜：既通气又不使菌进入
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（二）倒平板
灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面
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注意事项：
，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板
：无菌操作台用超净紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒
,另外三指持三角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在酒精灯火焰旁操作.
，灼烧灭菌
，要将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染.
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（三）大肠杆菌的扩大培养
将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中,使其在37℃摇床培养12小时。
注意事项:
;

灭菌,冷却后方能取菌;
.
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菌种扩增
摇床震荡培养12h（于LB液体培养基中）
本图来自十一学校
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（四）大肠杆菌的划线分离
分离方法:划线分离法和涂布分离法
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1、划线分离法无菌操作台上用接种环取菌后在固体培养基的平板上连续划线.
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平板划线的操作
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不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。
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一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；
二是存留在划***的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划***生长，会形成一个条状的菌落。
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（四）大肠杆菌的划线分离
注意事项:
,但要在培养基不同位置连续划线多次.

,培养皿倒置培养12~24h
1、划线分离法
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问题讨论
？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
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，为什么要等其冷却后再进行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
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分离后,一个菌体便会形成一个菌落,这是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一
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2、涂布分离法:是指将培养的菌液稀释一定的倍数,然后取一定量稀释液加在固体培养基上,用玻