人血管生成素受体酪氨酸激酶2酶联免疫分析试剂盒.doc

人血管生成素受体酪氨酸激酶2酶联免疫分析试剂盒
使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 96T
15ng/L - 400ng/L
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中血管生成素受体∕含免疫球蛋白样环和上皮生长因子或酪氨酸激酶2(Tie-2)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血管生成素受体∕含免疫球蛋白样环和上皮生长因子或酪氨酸激酶2(Tie-2)水平。用纯化的人血管生成素受体∕含免疫球蛋白样环和上皮生长因子或酪氨酸激酶2(Tie-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入血管生成素受体∕含免疫球蛋白样环和上皮生长因子或酪氨酸激酶2(Tie-2),再与HRP 标记的血管生成素受体∕含免疫球蛋白样环和上皮生长因子或酪氨酸激酶2(Tie-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管生成素受体∕含免疫球蛋白样环和上皮生长因子或酪氨酸激酶2(Tie-2)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人血管生成素受体
∕含免疫
球蛋白样环和上皮生长因子或酪氨酸激酶2(Tie-2)浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(800ng/L) ×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 ×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
400ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
200ng/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
100ng/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
50ng/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
25ng/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后