卵母细胞成熟抑制剂对猪卵母细胞成熟影响论文.pdf

两南人学硕L学位论文摘饕卵母细胞成熟抑制剂对猪卵母细胞成熟的影响临床兽壤专业硕士研究生周洪彬指导教师李跃民教授摘要与牛羊等动物的体外成熟卵母细胞相比。猪卵母细胞的体外成熟质精较蓐,这主爱袭现在郛母细胞驰继腿质成熬羞、多麟子受精率懿季珏胚胎授育缝力低。近年来,诲多学者崧舞母纲照体井成熟液里添如摔铡剡,以此来提齑体外成熟郛母辅胞的戒熟藤攮。搀制剂对鞯母细胞的核成熟率影响较小,但抑制剂能阻滞卵母细胞恢复减数分裂,使其停留在GV期,这谢利予使霏母细胞驰细胞核成熟和细胞质成熟同步,另外,抑制剂能使卵母细胞的细胞核戚熟时趣集中,减少7老纯郛母缨藏鹣凌钢。本文戳羚母缀惹蠹燕发滚染色震稳鏊、攘律密璃院霉、卵丘扩散程度和孤雌激活后卵裂率为主要检测统计指标,研究了抑制剂对卵母细胞成熟、卵雁扩散和发育能力的影响。以筛选出一种能够提高卵母细胞成熟质量的抑制刺。试验1:舜琏缨胞状态、努囊保存滏痊摹l袋榘瞻阕对卵母缎貔内生发滤染色震擒燮懿影响。本试验将不同辩丘细胞状态(巍整或较差)的COCs,以及不同卵巢保存溢度(25-30"C或3l一34 .c)和采集时间(8—)的COCs处理后进行荧光染色。观察其卵母细胞内生发泡染色威构溅。￡倒极显著凝哥:卵丘细胞较差豹COCs缝(%%,P(O,01),毽瓣缀藤GV期郛蹲缀瑰豹跑铡熬募不显著(% VS %,P>);在31。34℃ jl|℃低温保存组(%vs %,P<;%%,P(): 滁GVI襄舞簿缨憨跑铡受努繁采集黠阚影蟪势。不疑跨阕袋集舞巢静努母缨貔在其它鑫藏数分裂阶段的分稚情况基本一致。结果表明:COCs内卵最细胞完整程度、卵艇傈存温度茕1卵巢采集时间影响了卵母细胞内生发泡染色质构溅,将卵巢保存于25—30"。试验2:不鞠翻量3‘,5 。本试验将COCs醚枫分组培养于含有0、、、1和2 mmol·’,5’.cAMP的IVM培养液中,培养24h后染色,并同培养前(0h)卵母细胞的染色情况相比较。随着31,5‘.eAMV弃U量的增加,GVI—GVII期、 GV期舞母缀黪院秘连逐灏璞舞羹(24。06%、31,04%、%、55。30%、60,7l强:38,30%、55。88%、 %、%、%);卵母细胞在含2 mmol·U1 3’,5-cAMP的IVM液中培养24h簸, 、GV期卵母细胞比例均与0h组卵母细胞差异不照著(%vs 74,79%,P》: %VS %.P>)。结果表明:2mmol·L’1的3,,。试验3:3,5-cAMP}[t不同激素添加方式对卵母细胞减数分裂进程的影响。本试验分别于卵母细胞体外成熟的第24h、32h、40h和48h检测卵母细胞在各减数分裂阶段的分布情况。 3,。在第24h时,3,(%),%;在第32h,3, 组卵母细胞快速恢复减数分裂,主要分布在GVBD}11M1期(%、%),均与在不含抑制荆组卵母细胞差异不显著(%、38,60%,P>):在第40h,,但3,(%vs %,P<);在第48h,3,(%%,P>)。结果表明:3,。不同激素添加方式对卵母细胞减数分裂进程的影响。在IVM+FSH+‘.cAMP— IVM+LH中培养24h后的卵母细胞,+FSH+LH +3,5-cAMP一]VM中(%vs %,P<),前者增加了第32h、40h、48h时GV 卵母细胞的比例(%、%、%),减缓了卵母细胞的减数分裂进程,极显著降低了卵母细胞的核成熟率(