生化技术生产生物药物 ppt课件.ppt

项目4：生化技术生产生物药物
任务1：生化提取法生产木瓜蛋白酶
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教学安排：
1. 员工培训
由老师讲解肝素生产的理论基础及应用范围。
分配实操任务：肝素的生产浓酸提；
（3）酸性黏多糖常与蛋白质结合，需先用蛋白酶或浓碱、浓中性盐水解蛋白质与糖的结合键。
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1　多糖的提取
　　先行脱脂，以便多糖释放，方法：材料粉碎后，以甲醇或乙醇－***（1：1）加热搅拌温浸1－3h。
（1）稀碱液提取
　　木聚糖、半乳聚糖等溶于稀碱的糖，先用水溶涨，，提取液用盐酸中和，浓缩后，用乙醇沉淀。
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（2）热水提取
　　冷水浸泡溶涨，80－90℃热水提取，提取液除蛋白，离心，透析或离子交换除盐后，用乙醇沉淀。
（3）黏多糖的提取
　　各种黏多糖可用乙醇分级沉淀纯化。
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① 碱解；
②酶解。
2　多糖的纯化
（1）乙醇沉淀法；
　　多糖的浓度1－2%为佳，加入部分盐，对乙醇沉淀有促进作用。沉淀经乙醇脱水，真空干燥。
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（2）分级沉淀法
　　二价金属离子有促进作用。
（3）季铵盐络合法
　能与十六烷基溴化铵和十六烷基***化吡啶等表面活性剂在低盐浓度下沉淀，在高盐浓度下溶解。
　　盐浓度决定于聚阴离子密度，与多糖的硫酸化程度有关。
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低pH抑制阴离子，有利于增强硫酸黏多糖的选择性沉淀。
（4）离子交换层析法
　　用阴离子交换树脂交换吸附，吸附时以低盐浓度，洗脱时逐步提高盐浓度，可实现梯度洗脱。
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第三节　重要糖类药物的生
产工艺
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一　甘露醇
　　静脉注射后，可降低颅内压，使由脑水肿引起休克的病人清醒。也可用于大面积烧伤及烫伤产生的水肿，并有利尿作用，防止肾衰竭，治疗急性青光眼，还用于中毒性肺炎、循环虚脱症等。
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（一）结构与性质
　　又名已六醇，为白色针状结晶，不潮解，易溶于水和热乙醇，不溶于有机溶剂，在无菌水中比较稳定。
（二）生产工艺
　　海带和海藻中含量高。也可用发酵法和葡萄糖电解法生产。
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1　提取法
（1）工艺流程
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（2）工艺过程及控制要点
①浸泡提取、碱化、中和
　　加20倍量自来水，浸泡4批，每批2－3小时，然后用30%NaOH调pH10－11，静置8h，凝集沉淀多糖类黏性物，虹吸上清液，用50%中和至pH6－7，进一步除打，得中性提取液。
②浓缩、沉淀
　　沸腾浓缩，除去胶状物，至含甘露醇30%以上，冷却至60－70℃，加2倍量乙醇。
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③精制
　　沉淀物悬浮于8倍94%乙醇中，搅拌回流30min，出料，冷却过夜，离心得粗品，含量70－80%，重复操作一次，含量大于90%，***%，取此样品重溶于适量水中，加入1/8-1/10活性炭，80℃保温30min，滤清，结晶得精品甘露醇。
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二　1,6－二磷酸果糖
　　是急性心肌梗死、心功能不全、冠心病、心肌缺血、休克等症的急救药物。
生产工艺（酶转化法）
（1）工艺流程
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（2）工艺过程及控制要点
①取经多代发酵应用过的酵母渣，冻融，加入低物（8%蔗糖，4%NaH2PO4，30mmol/L　MgCl2，pH=)于30℃反应6小时；
②除杂蛋白　煮沸；
③阴离子交换树脂　上柱，用蒸馏水洗至pH7，分步洗脱，生成钙盐；
④转酸　钙盐悬浮于水中，用732树脂转酸，用2mol/－，除菌，冻干。
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三　肝素
　　抗凝血药，还有澄清血浆脂质，降低血胆固醇和增强抗癌药物等作用。
（一）结构与性质
　　基本单位：三硫酸双糖和二硫酸双糖，以2：1交替联结。
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（二）生产工艺（盐解离子交换工艺）
（1）工艺流程
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（2）工艺过程及控制要点
①提取　反应锅内，3%加NaCl，30%，53－55℃保温2h，升温至95 ℃ ，维持10min，冷却至50 ℃ 以下，过滤；
②吸附　加入***型714树脂，用量为提取液的2%，搅拌吸附8h，静置过夜；
③洗涤　树脂用水洗至清，滤干，；
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④洗脱　用2倍量3mol/LNaCl搅拌洗脱8h，滤干，再用1倍量3mol/LNaCl搅拌洗脱2h ；
⑤沉淀　等量95%乙醇过夜，收集沉淀，***脱水；
⑥精