结核分枝杆菌Rv0685蛋白的表达纯化及抗体检测蛋白芯片的制备与应用.pdf

山西医科大学
硕士学位论文
结核分枝杆菌Rv0685蛋白的表达纯化及抗体检测蛋白芯片的制
备与应用
姓名:陈恺
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:郝素珍
20100315
摘要目的:没蚬こ碳际蹩寺⒈泶铩⒋炕岷朔种Ω司鶵乖脀锄酣标签蛋白纯化基质进行蛋白纯化,锄分析其特异性。将抗原稀释五分析其特异性,制备蛋白芯片,进一步验证其特异性。檬笛槭易灾拼炕腅、和乖肮郝虻腖抗原制备蛋白芯片,检测俅步岷瞬』颊吆例健康人血清,分析其敏感性和特异性,为自主研发结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片试方法:谰軬中公布的结核分枝杆菌标准株加蛐蛄猩杓撇⒑受态,挑选阳性克隆进行序列测定,将序列正确的连接产物转化入大肠杆菌米钍口浓度进行诱导,甈治瞿康牡鞍椎谋泶镄问剑琀个浓度梯度点于醛基化修饰的玻片上,制备成结核抗体检测蛋白芯片,用临床样本对其特买的乖阌谌┗奘蔚牟F希聘鞒山岷丝固寮觳獾鞍仔酒皇褂酶眯酒表达质粒甊范擞盏急泶锏淖钍侍跫玫搅朔肿恿吭嘉蛋白,具有一定的特异性,蛋白芯片结果尚在考察之中。、蚆及乖票傅慕岷烁司固寮觳獾鞍仔酒越岷瞬进行联合诊断,其敏感性和特异性较高,可用于结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片试剂盒的关键词:结核分枝杆菌;抗体检测;基因克隆表达;蛋白芯片剂盒确立抗原基础。成引物;以处理过的结核分枝杆菌标准株D0澹ü齈扩增得到抗原基因片段;将酶切后的基因片段与原核表达载体连接,转化至甤感的温度、组氨酸异性进行进一步验证。票傅慕岷朔种Ω司乖璄、和肮俅步岷瞬』颊吆】堤寮煺哐R貉方屑觳猓治銎涿舾行院吞匾煨裕及罱岷丝固骞钩杀取结果结论:ü齈得到了结核分枝杆菌抗原正确的基因片段;成功构建了重组的研制。山西医科大学硕士学位论文
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方法的不足。近年来,国内外相继报道了脂阿拉伯甘露聚糖蝴⒔岷朔种Ω司刈前言蛋白抗原姬和等在结核病抗体检测中的应用【叮灿猩唐坊慕岷烁司固寮结核病是一种严重危害畜牧业和人类健康的慢性呼吸道传染病,我国第四次结核病流其感染率高,患病率高,耐药率高,死亡率高,已成为全世界***因传染病而死亡的主要疾病之一,所以,结核病的早期诊断、早期发现对该病的预防和治疗有及其重要的意义【俊一种高通量、高灵敏度、高特异性且微型化的蛋白质分析技术【,被广泛用于肿瘤、自身抗体疾病、酆现⒌攘俅布膊〉脑缙谡锒稀】,且显示出来的优点可以弥补传统检测任何一种抗原都不能将血清中的抗体全部检测出来,这是因为结核抗原复杂多样,抗体谱亦呈现出多样性,体内抗体的表达会随患者个体差异,免疫背景,疾病的不同阶段而不同,所以应用多种抗原进行联合检测已成为结核病血清学诊断的趋势。本实验旨在筛选试剂盒确立抗原基础。实验室前期利用双向电泳筛选出结核特异蛋白,经质谱分析其为蛋白,本实验用基因工程技术克隆、诱导表达了该蛋白,分析其特异性,制备蛋白芯片进一步验证其价值。并用实验室自制的、蚆抗原,制备结核杆菌抗体检测蛋白芯片用于检测临床血清样本,以筛选敏感性和特异性都较高的抗原用于行病学抽样调查报告显示,我国现有活动性肺结核患者颍舴谓岷嘶颊万【俊目前所用的实验室检测方法灵敏度低,检测时间长,既延误了治疗结核的最佳时间,又延长了感染传染期。因此,寻找一种结核杆菌抗体快速检测方法显得尤为重要。蛋白芯片是测试剂盒,但检测效果不一。特异性较好的抗原,并制备蛋白芯片对结核抗体进行联合检测,为自主研发结核抗体检测试剂盒的研制组装。山西医科大学硕士学位论文
総総,簉缩略词表啪%英文缩写聚合酶链式反应结核分枝杆菌三羟***氨基甲烷,縪培养滤液蛋白英文全名中文译名千道尔顿十二烷基磺酸钠千碱基对碱基对分钟秒磷酸盐缓冲液苯***磺酰***异丙基一硫代半乳糖苷冲辣根过氧化物酶扇潘***纤维素膜誩菇鹅协∞
日期:——年——月——日学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书本人声明,所呈交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。⒈疚陌凑昭9娑ǖ姆绞剑砸虿坏比〉醚桓T斐傻拿鸷Γ泄ǹ⒈救烁涸鹨蚵畚某晒皇挡姆删婪住本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校