低分子量鱼精蛋白的制备与评价.pdf

西南交通大学硕士学位论文低分子量鱼精蛋白的制备与评价姓名:尹超申请学位级别:硕士专业:生物化学与分子生物学指导教师:李萍;王建新 201205 西南交通大学研究生学位论文第1l页摘要硫酸鱼精蛋白作为抗肝素药物被中华人民共和国药典(2010年版)收录, 临床主要适用于肝素中毒的解救。硫酸鱼精蛋白通过注射给药,但其属外源蛋白,易引起过敏等不良反应,在使用时会受到诸多限制。低分子量鱼精蛋白(LowMolecularWeightProtamine,LMWP)是一段来源于鱼精蛋白的多肽, 可以酶解硫酸鱼精蛋白制备。LWMP保留了鱼精蛋白抗肝素的能力,同时又具有类似于TAT、寡聚精氨酸的穿膜肽性质,能与口服难吸收的大分子药物形成复合物,从而促进大分子药物的口服吸收。本论文从LMWP的检测制备、制备纯化和体内外实验等方面进行研究, 建立了LMWP的检测方法,建立、完善制备工艺,采用物理混合的方式制备 ,并验证其具有提高胰岛素生物利用度的作用,为后续口服胰岛素给药系统的开发提供参考,主要结论如下: 1)建立了LMWP的含量测定方法,比较了UPLC和HPLC这两种检测方法, 发现UPLC法优于HPLC法,并选择UPLC法为后续实验中LMWP的检测方法; 2)建立并优化了LMWP的制备和纯化的方法,经鉴定,制备纯化后的产物为高纯度LMWP; 3),证明胰岛素与LMWP 结合后,相对于胰岛素有更高的摄取和转运率,MTT实验证明,LMWP 在整个课题实验中使用的浓度范围内没有细胞毒性; 4)通过利用大鼠在体肠吸收模型,,并具有降血糖作用,降血糖效果与胰岛素单独给药相比有较显著差异关键词:LMWP,口服胰岛素,穿膜肽,快速蛋白液相色谱西南交通大学研究生学位论文第lII页 Abstract Protamine Sulfateis an antagonist ofheparin,it is recruited into the Pharmacopoeia ofPeople’SRepublic ofChina(version 200),and isnormally used to rescue heparinmethysis on Sulfate isonest ofactionby inj ection;however,it is akindofforeignproteins,and leadstheallergy attimes. Because Sulfateis 1imited used MolecularWeightProtamine(LMWP)is akindofpeptides,possesses similar function asprotamine,and it can LMWP remains the nature ofprotamine—the antagonist mote,it possesses theproperty ofTAT,Polyarginine as akindof rating Peptides (CPPs).bine withthelarge molecule medicines,CPPs willpromote the absorption of them. This thesiswasresearched on theassay,preparation& vivo and research established theLMWP assay and preparation methods, use the physical mixing to prepare LMWP-plex,and confirmed the results ofthisresearch provide a new thinking about the developing main conclusion asfollowed: Established theassay method ofLM∥pared the UPLC method with HPLC,chose the UPLC method forassay during the research