医学检验本科毕业论文.doc

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毕业论文
题 目
乙肝外表抗原的ELISA法定量分析方法学验证
年 级
2021级
层次
专科
专 业
临床医学
班级
一班
姓 名
学号
sis Verification Methodology.
前 言
乙肝病毒感染是我国最常见的感染性疾病之一，而乙型肝炎血清标志物是检测乙肝病毒感染最主要的病原标志。随着免疫学技术的不断开展，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平乙肝病毒得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义[1]。ELISA法具有较高灵敏度、特异性强、重复性好、可进展定量和半定量测定等优点，可以在酶免疫分析仪上做批量检测。目前临床上多倾向于做定量分析，假设想知道检验结果是否可靠，实验室那么必须对所用试剂盒进展方法学验证，本实验对XX蓝图生物工程生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进展准确度，精细度和检测限等方法学验证，现报告如下。
材料与方法
试剂盒 乙肝外表抗原ELISA法定量分析试剂盒，XX蓝图生物工程出品。
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仪器
酶标仪：Bio-Rad 680 ；洗板机：Bio-Rad 1575；超纯水系统：Millipore Elix ；电热恒温培养箱(DNP-9052)XX精宏实验设备；振荡器〔XX管械，KJ-201A〕；移液器；Tip头；EP管。
方法
．溶液配置
1×PBS缓冲液的配置： 称取8g NaCl、 KCl、 KH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，，最后加蒸馏水定容至1L即可。
标准品的配置：原始标准品浓度为8 ng/ml。。取6个2mlEP管，分别标记为S1-S6。50ul/well, 共1孔需50ul，每孔配置60ul备用，按照下表稀释方案进展稀释。
编号
终浓度
〔 ng/ml〕
预加1×PBS
取
剩余〔ul〕
标记
〔ul〕
S1
8
0
标准品
120
S2
4
60
S1
60
60
S3
2
60
S2
60
60
S4
1
60
S3
60
60
S5

60
S4
60
60
S6

60
S5
60
60

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质控品的配置：50ul/well, 共5复孔需250ul，配置300ul备用，取3个2mlEP管，分别标记为C1，C2，C3，按照下表稀释方案进展稀释。
编号
终浓度
〔 ng/ml〕
预加1×PBS
取
剩余〔ul〕
标记
〔ul〕
C1
6
150
标准品
450
C2
3
300
C1
300
300
C3

300
C2
300
300
．铺板方案 取出试剂盒中已包被酶标板，取出板条，按照下表铺板方案进展铺板在相应孔中依次参加系列标准品、质控品及空白对照，每孔50ul。空白对照参加1×PBS缓冲液。
．加样步骤
参加酶标抗体，50 ul/well，震荡。37℃电热恒温培养箱温育60min，取出后洗板4次， 参加A、B液, 50 ul/ well，37℃电热恒温培养箱温育15 min。参加终止液，50 ul/ well。酶标板放入酶标仪，盖上盖子，在电脑上翻开Microplate Manager ，选择450nm波长〔参照波长630nm〕，设置LAYOUT和报告模式，测定各孔吸收值。
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结果
标准曲线与线性X围
标准品理论浓度对应的实测OD值
以HBsAg理论浓度为横坐标，所测OD值为纵坐标作图，绘制标准曲线观察线性关系，结果显示R2=，显示具有良好的相关性
准确度〔回收率〕的验证
质控品理论稀释浓度对应实测浓度值
质控品做了3个浓度梯度，每个浓度做了5个复孔，下表是对每个浓度梯度进展准确度〔回收率〕的验证。
结果显示HBsAg 6ng/ml和3ng/%，%，满足限度要求在85%-115%的X围内，而HBsAg %，满足方法定量限在80%-120%的X围内。%，显示准确性好。

板内精细度的验证
上表中RSD(%)这一参数表示相对标准偏差，也就是变异系数CV值，HBsAg 6ng/ml的