考马斯亮蓝法测蛋白质含量.doc

考马斯亮蓝法测蛋白质含量
考马斯亮蓝法测蛋白质含量
考马斯亮蓝法测蛋白质含量
标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量
标准曲线
一般用分光光度法测物质的含量,先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此,制作标准白质含量样品（含量应处理在所测范围内）,依照操作步骤1操作,测出样品的A595nｍ，然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。
—，所以上述样品如果A５9５nm值太大,可以稀释后再测A５95ｎm值,然后再计算。
（五）、注意事项:
玻璃仪器要洗涤干净。
取量要准确。
玻璃仪器要干燥,避免温度变化。
对照:用被测物质以外的物质作空白对照。
考马斯亮蓝法测蛋白质含量
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药品的配制（磷酸缓冲液的配制）
一、药品的配制步骤
（一)、实验准备:
准备所需的药品和玻璃仪器。
洗涤。（怎样洗涤算干净？）
（二)、计算:
1、百分比浓度计算:
１)、G/V比
例如配1% NaCl,称1g ＮaCl溶于100ｍｌ 水。
2)、Ｖ/V比:
例如配75%乙醇1０0mｌ,75%×100%＝100%×X,　　X＝75ml。取７5ml无水乙醇，加２５ｍｌ蒸馏水。
乙醇：***：***=2：1：２配５0０ml,各取20０　ml，100 ｍl，20０ ｍl混合。
3）G／V比:用的较少,如计算灰分中某种元素如Ｆe的含量。
2、摩尔浓度计算：注：药品的分子量一般在标签中注明。
１)、 ＮaＣl配100ｍl。
M=质量/体积（L)××40= 摩尔数=G(g）/摩尔质量
2)、
mM＝毫摩尔数/体积（L)　 　 ××40=0．4g
毫摩尔数＝G(mg)/摩尔质量
３)、
mM=微摩尔数/体积（L)　 ××40=
微摩尔数=G（ug）/摩尔质量 ××40=
混合溶液配制的计算：
如配３ｕＭＥDTＡ， NBT以及6０uM 　　 　 溶液100mｌ,用50mＭ磷酸缓冲液配制。
注意:1、分别标定体积计算
2、分别配制再混合，但总体积不能 　 为10０ml
考马斯亮蓝法测蛋白质含量
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（三）、标量：
根据需要选择不同量程的天平根据要求去不同精度的测量器,如量筒或移液管。
电子分析天平的使用。
（四）、溶解:
根据药品配置要求选择溶剂。蒸馏水,双蒸水,无离子水等。
只能用烧杯溶解。注意加入溶剂只能加入总体积的２／3左右，剩余溶剂洗涤烧杯三次左右，直到洗涤干净。
小常识:药品标签中一般标识有药品的溶解性能和分子式，可根据分子式和所学的常识判断药品的结构和性质特点（包括溶解性质）。
如酸碱***物质的配制(AA、蛋白质、核苷酸等)如果溶解性能不好可以用稀酸或稀碱促进溶解,但pH应在被要求的范围内。
加热促进溶解，但注意应在配制的范围内有