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293T荧光素酶报告基因实验
在研究转录因子和启动子的实验中，你是否想确定结合位点的序列?
这些问题都可以用双荧光素酶报告基因检测系统来尝试解决。
双荧光素酶报告基因检测系统介绍
基于荧光素酶(luciferase )的发光原理，科293T荧光素酶报告基因实验
在研究转录因子和启动子的实验中，你是否想确定结合位点的序列?
这些问题都可以用双荧光素酶报告基因检测系统来尝试解决。
双荧光素酶报告基因检测系统介绍
基于荧光素酶(luciferase )的发光原理，科学家发明了双荧光素酶报告基因检 测系统。该系统包括萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase )和海肾荧光素酶
(Reni Ila luciferase )。两者可催化各自的底物发生氧化作用产生生物荧光 产生的荧光数值大小即表示了两种酶的表达量多少。 Firefly luciferase 和
Reni Ila luciferase 之所以被称为报告基因，是因为在基因表达调控研究时，利 用两者表达产生的 荧光比值可以监控、证实微观层面上的分子间的相互作用。 具体做法是：将靶基因的转录调控元件或 5 '启动子区克隆在
Firefly luciferase基因的上游，或把3' -UTR区或lncRNA结合序列克隆在
Firefly luciferase基因的下游，以研究启动子的强弱和转录因子对启动子的作 用或miRNA对目的基因或lncRNA的调控作用(见图2)。与此同时，弓I入 包含Ren ilia luciferase基因的TK载体作为内参，以便消除细胞转染等因素带 来的组间误差。
双荧光素酶报告基因检测系统中的luciferase来源于细菌、萤火虫、发光海洋
生物等，可以在哺乳细胞中直接表达，无需表达后修饰，直接具备完全酶活
性。与绿色荧光蛋白（GFP）不同，它们的发光检测不需要激发光激发，且发 光穿透力更强，这使其具备 可定量、高灵敏度及低背景 等特点。
双荧光素酶报告基因检测的应用
下面从实验方案设计、实验数据处理及结果分析几个方面介绍几个案例，供大 豕参考。
1、禾I」用双报告基因检测系统研究 miRNA与3 ' UTR的相互作用
实验目的：验证大鼠miR-1与靶基因ATG13 3' UTR是否发生作用，并进一 步确定miR-1与ATG13 3 ' UTR的作用位点。
实验方案：构建luc-3 ' -UTR-WT载体和luc-3 ' -UTR-mut载体，将其与海 肾载体及miRNA mimics 共转染293T细胞，转染24-48h后使用双荧光素酶 报告基因检测系统（翊圣产品货号：11402ES ）检测。
实验分组：
a Luc-NC + mimics-NC
b Luc-NC + mimics-miR-1
Luc-3 ' UTR-WT + mimics-NC
Luc-3 ' UTR-WT + mimics-miR-1
Luc-3 ' UTR-mut + mimics-NC
Luc-3 ' UTR-mut + mimics-miR-1
实验结果:
实验分组
Luc值（均值）
Ren值（均值）
Ratio （均值）
Luc-NC + mimics-NC
185214
32007

Luc-NC +