大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的细胞凋亡.pdf

华中科技大学同济医学院硕士学位论文ApoptosisafterIschemia—ReperfusionInjuryinRatRetinaDepartmentofOphthalmology,UnionHospitalTong]iMedicalCollegeofHuazhongUniversityoyScienceandTechnology,WuhanPostgraduate:LishiQiTutor.。DingZhengPl鸭AbstractPURPOSE:Observethephenomenonofapoptosisintheretinalischemia-reperfusioninjuryofratsMETHODS:Retinalischemiawasinducedbyincreasingthepressureoftheanteriorchamberfor60minutesAnimalsweregroupedandsacrificedat12h,24h,48h,and7dafterreperfusionrespectivelyTheretinaswereevaluatedbyhistopathoIogicalexamination,,:ellswerevarious,inrttR(Retinallschemia—ReperfusionInjury)±1625inRIR24hgroup,121士1609inRIR48hgroup,andO02±0141inthegroupof7dMeanwhile,P53immunochemistrydemonstratedpostiveproteininRIR24hgroup,ellsandP53positiveproteinwerenoticedinINLandGCL,butnotinONLConclusions:Thephenomenonofapoptosisisobviousintheinnerretinaafterischemia—reperfosioninjury,especiallyinthegroupofRIR24hKeywordRetinaIschemia/,又称程序性死亡,是机体维持自身稳定的一种基本生理机制,即机体通过细胞凋亡消除损伤、衰老及实变的细胞,以维持生理平衡“1。自kerr。1等1972年描述了细胞凋亡之后,细胞凋亡作为一种生理条件下的细胞死亡形式而备受关注。近年来认识到细胞凋亡的异常与许多眼科疾病有关,如视网膜神经母细胞瘤有神经元的过度增殖而缺乏凋亡;而老年性黄斑变性却是视细胞的过度凋亡所致。1。因此,研究视网膜的细胞凋亡及其调控机制,有助于深入探讨此类疾病的发病机制。近年来,组织因缺血而发生再灌注损伤的现象及机理成为了基础研究的一个热点。视网膜由于其特殊血供原因及J临床上常见多发的视网膜血管阻断性疾病如高血压、视网膜中央动脉阻塞等,使这项研究更具有现实意义。但缺血再灌注损伤的机制至今尚未完全阐明。有学者认为可能与刺激性氨基酸““、自由基州1的损害有关,国外亦有文献报道可能与视网膜内层细胞的过度凋亡“61有关。为此,Tim、T、iam“”等曾作过大量试验加以论证,但Tim等并未对凋亡细胞作出定量观察、分析。本实验用TUNEL法标记缺血再灌注性损伤的大鼠视网膜的凋亡细胞,并观察其细胞凋亡的数量变化,给出统计学结论,以进一步阐明视网膜缺血再灌注损伤中的细胞凋亡现象,为临床的治疗探寻新的思路。华中科技大学同挤医学院硕士学位论文材料和方法1、动物:37只成年sprague—Dawley(SD)大鼠(由同济医科大学动物实验中心提供),体重均在100—1509之间,雌雄不限。其中5只大鼠作正常对照,另32只为实验组,分为4组,每组8只,均饲养在正常昼夜环境中。2、视网膜缺血再灌注损伤模型:实验组32只大鼠腹腔注射水合氯醛(350mg/kg)全麻,将连接生理盐水输液管的7号头皮针刺入大鼠左眼前房,然后升高输液瓶至动物垂直距离150cm处,。1,可见球结膜苍白,虹膜迅速变白。眼底镜下可见视网膜苍白水肿,说明视网膜中央动脉的供血已被完全阻断,抗生素滴眼以保持角膜湿润并预防感染。视网膜缺血60分钟后,拔出输液针头,虹膜颜色迅速恢复正常,说明