寡克隆肝癌浸润淋巴细胞的体内抗肿瘤活性及机制研究.pdf

目录中文摘要??????????????????????????.1。英文摘要?????????????????????????...?????????????????????????.?????????????????????????????????..?????????????????????????????????.-ll一一、实验材料与主要器材??????????????????.13.(一)实验材料?????????????????????.、细胞株????????????????????、动物????????????????????????????...、主要生物试剂、化学药品和耗材?????????、主要溶液的配制?????.:???????????..14.(二)主要实验器材??????????????????..、实验方法???????????????????????..16.(一)细胞培养及传代?????????????????..、细胞复苏????????????????????.、细胞冻存???????????????????...、细胞传代????????????????????.16—4、细胞计数????????????????????.17.(--)建立H22肝癌荷瘤小鼠模型????????????.17.(三)TIL分离、培养和鉴定???????????????.、寡克隆肝癌TIL分离和培养???????????..、常规肝癌TIL分离和培养????????????..18.(四)流式细胞术检测CD8+T细胞的比例?????????.18.(五)检Nd,鼠肝癌TIL体外杀伤活性??????????.18.(六)建立过继免疫治疗H22肝癌荷瘤小鼠模型??????.19.(七)过继免疫治疗H22肝癌荷瘤小鼠??????????.19.(八)标本收集????????????????????..19.(九)ELISA法检测血清中细胞因子含量?????????.20.(十)H&E染色检测肿瘤组织中淋巴细胞浸润???????.21-(十一)??.23.(十--)统计学分析??????????????????..、实验结果???????????????????????..25.(一)建立H22肝癌荷瘤小鼠模型????????????.25.(二)寡克隆肝癌TIL的生长及鉴定???????????.25.(三)肝癌TIL对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤活性????.27.(四)肝癌TIL对荷瘤小鼠的过继免疫治疗效果??????.、???????、组织病理改变及淋巴细胞浸润??????????、治疗后血清细胞因子表达水平变化????????、TIL对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用?????????????????????????????????????????..?????????????????????????.?????????????????????????..?????????????????????????????????..????????????.????????????????????????????.59—寡克隆小鼠肝癌浸润淋巴细胞的抑瘤活性及机制研究摘要【研究目的】肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrationlymphocyte,TIL)是一群存在于肿瘤间质内的异质性淋巴细胞群,具有特异、高效的抗肿瘤作用,是过继免疫治疗(adoptivecellularimmunotherapy,ACI)的一种主要效应细胞。然而,虽然现有的制备方法能得到大量TIL,但经培养扩增的TIL抗瘤活性较低,临床疗效并不理想。研究表明,常规方法提取的TIL含有一定数量的调节性T细胞(regulationTcell,Treg),对于TIL的抗肿瘤活性具有抑制作用,、,是TIL应用于肿瘤治疗陷入困境的一个重要原因。因此,如何获得大量具有高抗瘤活性的TIL是过继免疫治疗的一个关键问题。本课题旨在建立一种寡克隆肝癌TIL培养方法,选择性扩增Treg含量少、抗瘤活性强的TIL细胞群,通过体外实验,了解11L抗瘤活性与各种细胞因子之间的关系,通过小鼠体内实验,研究寡克隆TIL的抗肝癌作用,从而为