碱性磷酸酶的分离纯化-袁野.ppt

碱性磷酸酶的分离纯化-袁野20101009
,剪碎后置于玻璃匀浆器中， M的醋酸镁及醋酸钠混合液4ml, 进行匀浆。转入离心管，并加2ml M的醋酸镁及醋酸钠混合液清洗匀浆器，之后将之倒入离心管
Tris-Mg(AC)2
BCA试剂
1. 取试管6支编号（体积单位为ml）
2. 混匀后37℃水浴30min, 562nm比色（小比色杯）
管号 空白 标准 A B C D
酶液体
酚标准液
Tris-Mg(AC)2
复合底物
管号 空白 标准 A B C D
酶液体
蛋白标准液
Tris-Mg(AC)2
BCA试剂
1. 取试管6支编号（体积单位为ml）酶活性测定
2. 取试管6支编号（体积单位为ml）酶蛋白含量测定
管号 空白 标准 A B C D
酶液体
酚标准液
Tris-Mg(AC)2
复合底物
1. 取试管6支编号（体积单位为ml）
2. 加入底物后, 立即混匀, 37 ℃ 准确15 %铁*** ml终止反应, 混匀, 静置15 min , 510 nm比色（大比色杯）
722S型分光光度计使用方法
开机预热15min以上（打开盖预热）。
转动波长选择钮，选用所需的波长。
将装有空白、标准、样品的比色杯放入比色杯架，使空白管对准光路。
按MODE 键选择trans模式。
打开样品室暗箱盖（光门自动关闭），按0%ADJ 键，即能自动进行机械零点的调整，。
盖好比色杯暗箱盖（光门自动开启），按100%ADJ 键，即能自动进行空白零点的调整，。（一次如有误差可再按一次）
按MODE 键选择吸光度测定模式（ABS灯亮），。
拉动比色杯架的拉杆，使测定杯进入光路，从数码显示上即可读出样品的吸光度
比色完毕后，关上电源开关，取出比色杯，将比色杯暗箱盖好，清洗比色杯并晾干。
分光光度计必须放置在固定而且不受振动的仪器台上，不能随意搬动，严防振动，潮湿和强光直射。分光光度计内放有硅胶干燥袋，需定期更换。
开机预热15分钟，待仪器稳定以后再开始进行测定。每年需定期进行波长校准。
必须保证测试样品为澄清的溶液，肉眼看不出来的轻微浊度也能引起读数的严重误差，必要时可通过离心来去除微粒。检测细菌培养液的光吸收时例外。
从冰箱中取出的样品一定要恢复到室温后再进行检测，否则低温会使水蒸汽在比色皿表面凝结，引起读数持续漂移上升。
使用分光光度计的注意事项
比色杯盛液量以达到杯容积2/3左右