细菌生长曲线测定.docx

细菌生长曲线测定生 32 程雨婧 2013012406 实验同组人:谢丰,严婧文,陈柏桦,陈新光,张新实验时间 2015 年5月 15日实验目的 1. 了解细菌生长曲线特征,测定细菌繁殖的代时; 2. 学****液体培养基的配制以及接种方法; 3. 反复练****无菌操作技术; 4. 了解不同细菌,不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同; 5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法实验原理将一定量的菌种接种在液体培养基内, 在一定的条件下培养, 可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性,如以细菌活菌数的对数做纵坐标,以培养时间做横坐标,可绘成一条曲线, 称为生长曲线。单细胞微生物发酵具有 4 个阶段,即调整期(迟滞期) 、对数期(生长旺盛期) 、平衡期(稳定期) 、死亡期(衰亡期) 。生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线, 同一种微生物在不同的培养条件下, 其生长曲线也不一样。因此,测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。测定微生物生长曲线的方法很多,有血细胞计数法,平板菌落计数法,称重法和比浊法。本实验才用比浊法, 由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比, 因此, 可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。将所测得的光密度值( OD600 ) 与对应的培养时间做图, 即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意, 由于光密度表示的是培养液中的总菌数,包括活菌和死菌,因此所测生长曲线的衰亡期不明显。实验仪器, 材料和用具大肠杆菌,枯草杆菌菌液及平板;培养基(100mL/250mL 三角瓶 X10 瓶/ 大组): 牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基取液器(5000ul, 1000ul 各一支); 培养箱, 摇床, 722 s 分光光度计;无菌 1000u l 枪头; 5000u l 枪头; 比色皿 3个+ 共用参比杯一个. 实验步骤 1. 准备菌种: 将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中, 37℃振荡培养 18h , 另外准备单菌落平板各 1 块; 2. 接种,分成不同小组做,实验结果共享: 第1 小组(1 )取 大肠杆菌/ 枯草芽孢杆菌菌液接种到 100ml 培养基, 37℃ 200rpm (2 )取 大肠杆菌/ 枯草芽孢杆菌菌液接种到 100ml 培养基, 37℃ 200rpm (3 )取 大肠杆菌/ 枯草芽孢杆菌菌液接种到 100ml 培养基, 37℃ 200rpm 第2 小组(4 )取 金黄色葡萄球菌菌液接种到 100ml 培养基, 37℃ 200rpm (5 )取 金黄色葡萄球菌菌液接种到 100ml 培养基, 30℃ 200rpm (6 )取 金黄色葡萄球菌菌液接种到 100ml 培养基, 37℃ 100rpm 第3 小组(7 )取一环大肠杆菌/ 枯草芽孢杆菌菌落接种到 100ml 培养基, 37℃ 200rpm (8 )取 大肠杆菌/ 枯草芽孢杆菌菌液接种到 100ml 培养基, 37℃ 100rpm (9 )取 大肠杆菌/ 枯草芽孢杆菌菌液接种到 100ml 培养基, 30℃ 200rpm 每培养一小时取样一次( , 加测 1次). 对照组测量起始 pH , 所有瓶子测量发酵 7h 结束测 pH 。注意全班同时取样,同时开始振荡,取样期间时间不算。 3. 测量: 取 500ul 培养液到 2000ul 蒸馏水中,以蒸馏水为对照,测 OD600 ;注意固定参比杯, 不要调动波长旋钮;固定一台分光光度计;零小时也要测,把结果填入记录表格中。实验结果与讨论 500ul 培养液到 2000ul 蒸馏水中, 以蒸馏水为对照,测 OD600 ( 稀释 5倍), 如下表1 所示: 表 1. 金黄色葡萄球菌生长曲线 OD600 值发酵时间( h) 菌种周次有无 NaCl 接种量温度℃转速 rpm 012 3 4567最终 pH值金黄色葡萄球菌周四培养基对照组 7 OD600 无 1 ml 37 100 42 33 85 5 58 87 34 21 82 4 30 200 35 37 61 14 5 93 64 7 82 33 2 37 200 34 37 97 45 88 91 28 91 01 79 5 有37 100 05 05 55 0