机体免疫功能的检测技术.ppt

第九章 机体免疫功能的检测技术
江文正
第一页，共九十三页。
第一节 免疫细胞的分离与纯化
第二节 体液免疫功能的检测
第三节 细胞免疫功能的检测
第四节 细胞因子及其受体的
　　　 检测技术
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第十六页，共九十三页。
4. 淋巴细胞亚群的分离
（1） E-玫瑰花环沉降法
（2） 尼龙棉纤维分离法
（3） 亲和分离法
（4） 抗体/补体介导的特异性细胞
毒作用分离法
（5） 免疫磁珠分离法
（6） 流式细胞仪分离法
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第十七页，共九十三页。
（1）E-玫瑰花环沉降法
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第十八页，共九十三页。
（2） 尼龙棉纤维分离法
T细胞：不吸附
B细胞：吸附
T细胞(90%)
B细胞(80%)
37℃ 1-2h
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10-20% 小牛血清培养液
第十九页，共九十三页。
（3）亲和分离法
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第二十页，共九十三页。
（4）抗体/补体介导的特异性
细胞毒作用分离法
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在补体的作用下裂解与抗体结合的细胞，从而分离出不能与此抗体结合的细胞亚群。这是一种负选性分离法，简称细胞毒法。
第二十一页，共九十三页。
（5）免疫磁珠分离法
PBMC + 生物素标记抗体 + 亲和素标记磁珠
第二十二页，共九十三页。
CD56 MicroBeads: positive selection
NK Cell Isolation Kit: negative selection
分离前
分离后
第二十三页，共九十三页。
BrdU
PBMC
NK-depleted PBMC
%
41%
第二十四页，共九十三页。
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第二十五页，共九十三页。
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（6）流式细胞仪分离法
第二十六页，共九十三页。
四、其他细胞的分离和收集
（一）巨噬细胞的分离和收集
（二）NK细胞细胞的分离
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第二十七页，共九十三页。
（一）吞噬细胞的分离和收集
人：组织液（斑蝥敷贴法）
滤纸蘸取10%中药斑蝥酒精浸出液
臂内侧皮肤
48小时后局部形成水疱
吸取疱中的组织液, 内含巨噬细胞
第二十八页，共九十三页。
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小动物：腹腔巨噬细胞
小鼠腹腔内注入石蜡油
３~４天后吸出腹腔浸出液
70~80%为巨噬细胞
第二十九页，共九十三页。
（二）NK细胞的分离
单核细胞: 粘附法
B细胞: 尼仑棉纤维
T细胞: E-玫瑰花环沉降法
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PBMC
NK
第三十页，共九十三页。
第二节 体液免疫功能的检测
一、免疫球蛋白的定量检测
二、B细胞数目及功能的检测
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第三十一页，共九十三页。
一、免疫球蛋白的定量检测
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（1）单相免疫扩散试验
（2）双相免疫扩散试验
（3）火箭电泳
（4）中和反应
（5）ELISA
第三十二页，共九十三页。
单相免疫扩散试验
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FLASH
第三十三页，共九十三页。
双相免疫扩散试验
第三十四页，共九十三页。
双相免疫扩散试验
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FLASH
第三十五页，共九十三页。
（3）火箭电泳
第三十六页，共九十三页。
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第三十七页，共九十三页。
血清抗体
病毒
接种细胞或鸡胚
计算半数保护率（PD50）
（4）中和反应
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第三十八页，共九十三页。
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第三十九页，共九十三页。
二、B细胞数目及功能的检测
1. 外周血B细胞数目的检测
2. 外周血B细胞功能的检测
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第四十页，共九十三页。
1. 外周血B细胞数目的检测
◆ 免疫荧光技术
◆ 花环试验
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第四十一页，共九十三页。
荧光显微镜
第四十二页，共九十三页。
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CD19
CD3
流式细胞仪
第四十三页，共九十三页。
B细胞EA、EAC玫瑰花环形成示意图
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第四十四页，共九十三页。
2. 外周血B细胞功能的检测
◆ B细胞非特异性增殖
◆ 抗体产生能力
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第四十五页，共九十三页。
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B细胞+刺激物（PWM，LPS）
第四十六页，共九十三页。
溶血空斑试验