羊卵泡卵母细胞孤雌激活研究.doc

1 羊卵泡卵母细胞孤雌激活研究【摘要】目的卵母细胞孤雌激活是胚胎体外生产的一项重要技术。本试验通过乙醇、离子霉素和 6-DMAP 不同浓度和不同激活时间的优化组合, 提高孤雌激活效果和孤雌胚发育能力。方法与结果试验 1, 体外成熟的卵母细胞经 5M 离子霉素或 7% 的乙醇激活 5min , 然后在 6-DMA P 中激活 4h, 6-DMAP 的浓度设置为 、 、 和 mM ; 结果表明, 浓度为 和 6-DMAP 激活的卵母细胞卵裂率( % ) 显著高于其他各组(P< )。试验 2, 体外成熟的卵母细胞经 5M 离子霉素激活 5min ,然后在 6-DMAP 中激活 1h、 3h、 5h、 7h和 9h ;结果表明, 卵母细胞在 6-DMAP 中激活 5h和 7h 其囊胚率( % 和 % ) 显著高于其他各组(P< )。结论本研究认为 Ionomycin 和乙醇为激活剂时, 6-DMAP 的孵育时间以 5h为宜。 Ionomycin 比乙醇激活效果好, 但乙醇与 Ionomycin 简单便捷。【关键词】羊;卵母细胞;孤雌激活 The study on ic activation of sheep oocytes 2 【 Abstract 】 ic activation of oocytes was important technology of embyos production in experiment was undertaken to improve development of ic embryos following bined treatments of ethanol , ionomycin , and 6- Experiment 1, in vitro matured oocytes were treated with 5M ionomycin or 7% ethanol for 5min followed by incubation in 6-DMAP for 4h, which concentration was mM , mM , mM and mM ; The result shows that the cleavage rates ( % ) of the mM and mM 6-DMAP groups were significantly higher than the other groups (P< ) .In Experiment 2, in vitro matured oocytes were treated with 5M ionomycin for 5min followed by incubation in mM 6-DMAP for 1h, 3h, 5h, 7h or 9h;The result shows that the blastoeyst rates ( % and % ) of the 5h and 7h groups were significantly higher than the other groups (P< ).【 Key words 】 sheep ; oocytes ; ic activation 卵母细胞体外受精和孤雌激活是胚胎工程研究领域获得胚胎的两条重要途径, 卵母细胞正常受精时, 精子与卵子质 3 膜直接融合或通过表面上的受体蛋白引起卵内 Ca2+ 浓度的瞬时升高,由此引起包括皮质颗粒( CG )释放、细胞质内 pH 的改变、母源 mRNA 的补充等一系列激活反应,最终导致原核的形成、 DNA 合成的起始和卵裂; 卵母细胞孤雌激活是一种人工激活卵的方式,通过电脉冲、 Ionomycin 、乙醇、钙离子载体、放线菌酮和 1,4, 5- 三磷酸肌醇( IP3 )等都可以引起卵母细胞的激活,使 MII 期卵母细胞不经过受精过程完成早期胚胎发育,获得孤雌胚胎。孤雌激活与体外受精都是以 MII 期卵母细胞为起点, 都能获得早期胚胎,但孤雌激活与体外受精存在本质的区别;前者是人工活化卵母细胞, 后者是自然活化卵母细胞; 孤雌激活胚是通过抑制第二极体排放, 使其与原来的卵母细胞核融合构成二倍体的胚胎, 而体外受精胚胎是由雌雄配子融合所获得的胚胎, 孤雌激活和体外受精是两项相对独立的技术但又有密切的联系。目前大部分哺乳动物体外受精产生胚胎的发育率和妊娠率都比较低, 但有试管动物相继诞生; 孤