《高效液相色谱hpl》.ppt

高效液相色谱HPLC
生物分析小组作业
组长：姬付博
小组成员：李云峰、向治霖、华俊豪、赵琳琳、张阳、刘鸣军、魏友武、董鹏、杨睿、罗静、查效兵、周桃、李建月
精选课件
目录
基础知识
应用及举例
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色谱是什么？集单一组分或制备。
理论板数是指在一些分离操作中为完成某一指定分离要求所需理论塔板的数量。
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按分离机制分类
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高效液相色谱的应用
医药研究
食品分析
环境污染
精细化工
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医药研究
高效液相色谱法由于具有高选择性、高灵敏度等特点，已成为医药研究的有力工具。
人工合成药物的纯化及成分的定性、定量测定，中草药有效成分的分离、制备及纯度测定，临床医药研究中人体血液和体液中药物浓度、药物代谢物的测定，新型高效手性药物中手性对映体含量的测定等，所有这一切都需用到高效液相色谱的不同测定方法予以解决。
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医药应用举例——巴比妥类药物
镇静药中以巴比妥类药物应用最多，巴比妥类是丙二酰脲的衍生物，具有镇静、催眠、止痛作用。图6-4-25为巴比妥类药物用反相离子对色谱分离的色谱图。色谱柱为涂布丁***的Lichrosorb RP - 2 柱（10μm，*150mm）， 四丁基铵（TBA），pH=，，检测器为：UVD（254nm）
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食品分析
食品种类繁多，各种食品具有不同的特性和营养成分，它所包含的糖、有机酸、维生素、蛋白质、氨基酸、脂肪等直接关系人体的健康。在食品生产过程，往往需添加防腐剂、抗氧化剂、人工合成色素、甜味剂、保鲜剂等化学物质，它们的含量过高就会危害人体健康。此外由于环境污染，也会使食品沾污有害的微量元素、农药残留、***等。因此食品分析的重要性日益受到人们的关注。   
近年来高效液相色谱分析法在食品分析中的应用日益增多，它比化学分析法操作简便、快速，并能提供更多的有用信息。
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食品分析举例——蜂王浆
蜂王浆中有效成分10-羟基-δ - 2 - 癸烯酸
蜂王浆是工蜂采食花粉、花蜜后，由工蜂体内王浆腺分泌出的粘稠状物质，其含有蛋白质、氨基酸、维生素、酶、激素、乙酰胆碱和有机酸等多种营养物质。其中含有的10- 羟基-δ - 2 - 癸烯酸，又称蜂王酸，具有抗癌作用
它的色谱分析条件是色谱柱ODS(5μm,*250mm）， 甲醇/水（1-:55:35），流量为1mL/min，室温，以对羟基苯甲酸甲酯（或辛二酸）作内标物，用二极管阵列紫外吸收检测器（UV POAD ,205nm）进行检测。
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环境污染
高效液相色谱方法适用于对环境中存在的高沸点有机污染物的分析，如大气、水、土壤和食品中存在的多环芳烃、多***联苯、有机***农药、有机磷农药、氨基甲酸酯农药、含氮除草剂、苯氧基酸除草剂、酚类、***类、***、亚硝***等。
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环境污染应用举例——农药残留
农药可分为杀菌剂、除草剂和杀虫剂，由化学组成可分为有机***农药、有机磷农药、氨基甲酸酯、含氮除草剂、苯氧羧酸除草剂等
有机磷农药施用后，受热会分解，残留物危害较小，但其自身有强毒性和恶臭味，施用过程会对人畜造成伤害。
氨基甲酸酯类农药具有高效、低毒的特点。利用反相键合相色谱分离。
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精细化工
在精细化工生产中使用的具有较高分子量和较高沸点的有机化合物，如高碳数脂肪族或芳香族的醇、醛和***、醚、酸、酯等化工原料，以及各种表面活性剂、药物、农药、染料、炸药等工业产品，都可使用高效液相色谱法进行分析。
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精细化工应用举例——聚合物
使用凝胶渗透色谱柱分析聚乙二醇标准物的谱图
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课本中的应用实例
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一、头孢克洛的HPLC测定法
高效液相色谱是近年来发展最快的方法，他能有效的分离供试品中可能存在降解产物、未除尽的原料和中间体等杂质，并能准确定量，适用于本类药物的原料、各种制剂及生物样本的分析测定。
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色谱条件和系统适应性实验：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸二氢钾-乙***溶液为流动相；流速为1ml/min;波长检测为254nm。精取头孢克洛对照品和头孢克洛δ-3-异构体对照品适量，加流动相溶解并制成每1ml中分别含有头孢克洛及头孢克洛δ-3-，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，头孢克洛及头孢克洛δ-3-异构体的分离度应符合要求。理论板数按头孢克洛峰计算不低于1500.
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测定法：
，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取20μl注入液相色谱仪