PAR4在初级感觉神经元的表达及对TRPV1调控机制的分析.pdf

泰山医学院
硕士学位论文
PAR4在初级感觉神经元的表达及对TRPV1调控机制的研究
姓名:陈丹
申请学位级别:硕士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:王昭金
2012-02
在初级感觉神经元的表达及对冲调控机制的研究中文摘要研究生:陈丹专业:人体解剖与组织胚胎学导师:王昭金教授方法甌呀夥ㄌ崛∨嘌腄感觉神经元总肦检测基因的表达以及激动剂对和虮泶锏挠跋欤癙信号通道对鸓赴呀庖禾崛∨嘌腄神经元总蛋白,检测激动剂对结果吹打,制成细胞悬液,种置于六孔培养板观察不同时间段细胞的数量,大小以及突起的长度。接种于六孔培养板的神经细胞培养∈弊饔茫怪孟晕⒕迪鹿鄄欤杉分神经细胞已贴壁,贴壁的神经细胞为圆形或椭圆形,胞体周围有一圈光晕,尚无突目的蛋白酶活化受体狦蛋白偶联受体,参与多种病理生理的过程。最近研究发现在外周炎症和疼痛调节中具有重要作用。以培养的大鼠背根神经节芯跎窬NQ芯磕P停芯縋诔跫陡芯跎窬5谋泶铩9鄄霵受体及其活化的细胞内机制,以及与伤害性感觉受体瞬时电位香草酸受体亚型涞南嗷ス叵担佣=徊讲鱌斡胪庵芡葱藕诺牡鹘谧饔锰供实验依据。约毙苑掷搿⑴嘌笫蟮腄感觉神经元为研究模型,利用免疫荧光的方法结合激光共聚焦显微镜技术,研究和谔逋馀嘌拇笫驞感觉神经元的表达以及两者的共存。表达和介导虮泶锏牡鹘谧饔谩和鞍妆泶锏挠跋煲约癙信号通道对表达和影响冲蛋白表达的调节作用。瓺感觉神经元的分离与培养:年轻雄性大鼠,体重约,急性分离焖偃∷ú郉,消化、
较有统计学意义∽.∞,j盤结果显示:加激动剂组与空白对照组相比ざ炼詎熔诔跫陡芯跎窬1泶锏挠跋欤航玃ざ起。神经元的细胞核位于细胞中央或胞体一侧,核仁明显。接种小时后,大部分细胞已贴壁,贴壁细胞长出小突起,除单个散布的神经细胞外,常可见几个或多个神经细胞聚在一起,它们向四周发出树枝状突起。培养天的神经细胞的突起逐渐延长增粗,可看到神经细胞的突触交织在一起形成稀疏的网状结构。随着培养时间的延长,神经细胞突起的主干和分枝都明显延长并增粗,神经细胞突起形成的网络结构变得更加稠密,神经细胞胞体逐渐增大。随着培养时间的延长,细胞数量会减少。甈贒神经元的表达:免疫荧光组织化学结合激光共聚焦结果显示,在体外培养的大鼠窬赴可见大量的感觉神经元表达,阳性神经元数量和形态变化与上述体外培养的窬@嗨啤E嘌天的阳性细胞多为一些中小神经元,直径为—微米,也偶可见一些大型神经元表达,形态呈圆形或椭圆形。培养小时后,阳性神经元生长突起出现,培养天窬?沙鱿諴粜灾嵬弧Q粜员记物主要出现在细胞膜、细胞浆,细胞核未见表达。甈隩在跫陡芯跎窬9泊妫在体外培养的大鼠纳窬赴嘌天的粜韵赴隤粜细胞相似,可见大量的中、小型粜陨窬0澹翁试残位蚵言残巍錠的阳性物分布于细胞膜、细胞浆,细胞核未见标记。嘌∈焙螅杉鸗阳性的树突和轴突。荧光双标结合激光共聚焦结果显示:体外培养的窬>可见/强双标记。对个培养孔盖玻片上的赴剖允荆河/阳性神经元表达冲,同样,粜陨窬R脖达,细胞计数有%士%/∈保琖色结果显示:激动剂使蛋白的表达量增加,加激动剂组与空白对照组比的表达量增加倍,加激动剂组与空白对照组比较有统计学意义激动剂和抑制剂对表达的影响:..
激动剂组相比都使蛋白表达量减少,但加ざ磷榈脑ǖ鞍椎谋泶入种萍恋男斟谋泶锪吭黾印<尤隤激动剂组与空白对照组相比膍錋的表达量减少,加入种萍磷橛肟瞻锥哉兆橄啾仍誂的表净罨上碌鱐錠鞍缀蚼贒初级感觉神经元的表达。抑制剂可增强訮』州蛋白和斟泶锏牡骺睾妥饔谩和抑制剂组和空白对照组比较均有统计学意义汨.∞/结果显示:和抑制剂激动剂组和种萍磷橄啾龋尤隤激动剂的縖Ⅲ谋泶锪考跎伲结果显示:沿神经元鞍统计学意义伊∞峁允荆篜ざ潦筎Ⅲ谋泶锪豈直鸱跤嘌纳窬赴饔后,再加入激动剂孵育∈:加ざ梁鸵种萍磷橛爰尤隤量相对于加入种萍恋腄神经元表达减少,加入种萍恋蘑粝蛋白的表达量与加入ざ磷镈神经元气表达增加。加入ざ达量增加丁<尤隤抑制剂组和空白对照组比较均有统计学意义伊∞/甈猿跫陡芯跎窬猅表达的影响及细胞内机制:激动剂对泶锏挠跋欤玃ざ罙甆豈入培养的神经细胞内作用∈保瑆的表达量与空白对照组相比下降%覲ざ磷橛肟瞻锥哉兆楸冉嫌减少与空白对照组相比下降%覲ざ磷橛肟瞻锥哉兆楸冉嫌型臣学意义伊晒夕。结论逋馀嘌拇笫驞初级感觉神经元表达觥P矶郟粜陨窬S冲共存。瓵缮系鱌蛋白和在跫陡芯跎窬5谋泶铩ざ量梢种艫訮Ⅵ蛋白和表达的调控作用,而激动剂可增强对冲蛋白和表达的调控作用,;背根神经节;感觉神经元
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