Van Gieson胶原纤维染色方法的探索.doc

Van Gieson胶原纤维染色方法的探索.docVan Gieson胶原纤维染色方法的探索
【关键词】 Van Gieson染色法;胶原纤维;褪色
在科研工作中,普遍使用Van Gieson染色法显示胶原纤维,但该法中各种染液的对抗作用往往不易得到满意的效果。如苦味酸对细胞核有褪色作用,酸性品红与苦味酸混合的比例不同直接影响染色结果。如何优化三者间的关系,使染色达到最佳效果,我们进行了以下探索。
1 材料与方法
染液配制
g,钾矾10 g, g,蒸馏水200 ml。加热使溶解,此时溶液为蓝色,加入水合氯醛10 g, g,继续加热煮沸5 min,此时染液呈紫红色,冷却后过滤,便可立即使用。
Harris苏木素染液苏木精1 g(溶于10 ml无水乙醇中),钾矾20 g,蒸馏水200 ml, g,冰醋酸8 ml。将钾矾溶于蒸馏水中,加热使溶解,稍冷后加入苏木精,再缓慢加入氧化汞。冷却后加入冰醋酸,过滤备用。一周后成熟可用。
Van Gieson染液 A液:1%酸性品红水溶液;B液:苦味酸饱和水溶液。临用前分别按A∶B=1∶9、2∶8、3∶7、4∶6的比例混合使用。
染色方法切片经二甲苯脱蜡,各级梯度酒精“下行”至水。分别以ayer、Harris苏木素染液深染30 min,流水冲洗使蓝化,蒸馏水漂洗,吸水纸吸干。Van Gieson染液染色5 min,吸水纸吸干,95%酒精(滴加数滴苦味酸水溶液)分色数秒钟,吸水纸吸干,无水乙醇脱水30 s,二甲苯透明,DPX胶封片。
2 结果
细胞核颜色用Mayer苏木素染色,细胞核呈紫蓝色,再经Van Gieson染色后,细胞核略有褪色,变为棕红色,但仍清晰;用Weigert铁苏木素染色,细胞核呈灰黑色,再经Van Gieson染色后,细胞核基本不褪色;用Harrise苏木素染色,细胞核呈深蓝色,再经Van Gieson染色后,细胞核几乎完全褪尽。
纤维颜色用1%酸性品红与苦味酸饱和液按不同比例配成的Van Gieson染液染色后,肌纤维呈不同深浅的黄色,胶原纤维为不同程度的红色,红细胞呈黄绿色。具体结果如下:
表1 酸性品红与苦味酸混合比例及染色结果(略)

3 讨论
胶原纤维是结缔组织的一种组成成分,由成纤维细胞所产生,易被酸性染料着色。Van Gieson作为传统的胶原纤维染色方法之一,其配方中酸性品红用于染胶原纤维,而苦味酸能使肌纤维黄染,染色效果鲜艳明亮,且本法不受组织固定液的限制,因而深受科学研究欢迎。本文中试探将Van Gieson染液中两种染料按不同比