【实验报告】血液凝固及其影响因素.doc

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动物生理学实验报告
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动物生理学实验报告
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【实验过程】
动物麻醉及颈部手术(此部由助教老师操作)
取一只动物,称重。按1g/kg体重的剂量将乌拉坦(氨基甲酸乙酯)由耳缘静脉缓慢注入,观察动物肌张力、呼吸与角膜反射的变化。动物麻醉后背位固定于兔手术台上。
剪去颈部手术野的毛,沿颈正中线在喉头上一指至锁骨上一指的地方作一5~7cm的皮肤切口。分离皮下组织及肌肉。
颈总动脉插管(此部由助教老师操作)
在气管两侧辨别并分离颈总动脉,颈总动脉下方穿两条线备用。在左侧颈总动脉的近心端夹一动脉夹,在动脉夹远心端距动脉夹约3cm处结扎。用小剪刀在结扎线的近侧(结扎线与动脉夹之间)沿向心方向剪一小斜口(约占管径的一半),向心脏方向插入动脉插管,由备用的线结扎固定。取血时将动脉夹松开即可。
血液凝固的加速和延缓观察
打开兔颈总动脉夹,血液从动脉插管流出,弃去第一份1mL动脉血后,向每个试管中注入1mL兔动脉血,并摇匀。
自血液流出动脉插管开始计时。除第1管外,其他各管每隔15秒钟将试管倾斜一次,观察液面是否倾斜即血液是否流动,直到试管内血液不再流动为止,记录凝血时间。
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当第2管已经凝固时,再倾斜第1管看血液是否凝固,若尚未凝固则按上述方法每隔15秒钟倾斜一次,直到血液凝固为止,记录凝血时间,即为该兔血的凝固时间。
以第2管为对照,各管观察其他各管中血液凝固时间。
向第9管中滴加2%***化钙2滴,观察血液是否凝固。
取出第5管中的玻棒,用水洗净,观察附着在玻棒上的纤维蛋白。
注意事项:
取放试管时要用拇指和食指捏住试管的上端,不要握住试管的底部,以免手的温度影响结果。
每支试管口径及采血量要尽量一致,不可相差太大。
记录凝血时间要准确。
判断凝血的标准要前后一致。一般以倾斜试管达45°时,试管内血液不见流动为准。
【实验结果及相关讨论】
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管号
实验条件
凝血时间
(一组)
凝血时间
(二组)
现象解释
1
%(6滴)
大于20min
大于20min
肝素是抗凝剂,能不可逆的阻止血液凝固。由于肝素钠具有带强负电荷的理化特性,能干扰血凝过程的许多环节,在体内外都有抗凝血作用。其作用机制比较复杂,主要通过与抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)结合,而增强后者对活化的Ⅱa、Ⅸa、Ⅹa、Ⅺa和Ⅻa凝血因子的抑制作用。其后果涉及阻止血小板凝集和破坏,妨碍凝血激活酶的形成;阻止凝血酶原变为凝血酶;抑制凝血酶,从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白。中和组织凝血活素(因子
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Ⅲ)。抑制血小板的聚集和释放。它对血中有机成分和无机成分的测定均无影响。
2
加入2%(6滴)
大于20min
血液凝固的多个环节中都需要钙离子的参与,故通常用枸橼酸钠、草酸钠和草酸钾作为体外抗凝剂,它们可与钙离子结合而除去血浆中的钙离子,从而起到抗凝作用。理论上当继续向血液中加入CaCl2溶液,CaCl2中的钙离子会起到凝血因子IV的作用,从而使再次启动凝血过程,血液凝固。草酸盐是可逆性抗凝剂。但本次实验中加入CaCl
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2后并没有出现凝血现象,可能是CaCl2溶液配置有问题,或者由于操作不当,凝血因子已经完全失活。
3
室温(6滴生理盐水)
静置
7min30s
7min30s
血液流出血管后,很快会凝固。血液流出血管后血小板
4
室温(6滴生理盐水)
每隔15S倾斜45°
4min
5min
倾斜可加速血小板的粘附聚集过程,并加大血小板释放的凝血因子与血细胞的接触面积,从而加快了凝血的过程。该过程是内源性凝血过程。
5
细玻璃粉少许(6滴生理盐水)
2min45s
3min
玻璃粉是异物,可激活凝血因子
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Ⅶ及血小板,启动凝血过程。
6
脑组织浸出液(6滴)
15s
30s
脑组织液中有组织因子途径抑制物,是外源性凝血途径的特异性抑制剂,因而能加速凝血过程。
7
置于40℃水浴(6滴生理盐水)
165s
165s
适当升高温度,能增加酶的活性,加快凝血过程。
8
置于10℃水浴(6滴生理盐水)
大于20min
降低温度可以降低酶的活性,延缓凝血过程。
9
竹签搅拌(6滴生理盐水)
有富有弹性的纤维蛋白纠缠在竹签上
同上
在竹签的搅动下,特别是缠上线的接触面粗糙的竹签,能加速凝血过程,使凝血因子按一定顺序相继激活而生成凝血酶,最终使纤维蛋白原变为纤维蛋白,而纠结在竹签上,形成一层蛋白膜。
机体凝血系统包括凝血和抗凝两个方面,两者间的动态平衡是正常机体维持体内血液流动状态和防止血液丢失的关键。机体的正常止凝血,主要依赖于完整的血管壁结构和功能,有效的血小板质量和数量,正常的血浆凝血因子活性。其中,血小板和凝血因子是生理性止凝血的重要成分,(见图1)。抗凝系统不仅包括抗凝因子,还包括纤溶系统。
BT出血时间 CFT束臂试验 CRT血块收缩试验 BPC血小板计数
CT凝血时间 RT复钙时间 APTT活化部分凝血活酶时间
PT凝血酶原时间 PF3血小板第3因子 TF组织因子 Fb纤维蛋白
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