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◆Biologyofcellsinculture
◆Fluidforcellculture
◆Standardcellculturetechniques
◆Establishingacelllineorcellstrain
◆Cellfreezingandrecovery
◆AnimalCellEngineering◆
Section2:细胞培养用液
水和平衡盐溶液
天然培养基
合成培养基
无血清培养基
其它常用液
培养基的配制
一、水和平衡盐溶液

玻璃蒸馏器制备的三次蒸馏水
尽量减少开启次数
存放时间不宜过长,一般不要超过2周
最好现制现用
(balancedsaltsolution,BSS)
主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养。
主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。
Ringer、PBS、HanksorD-Hanks(无钙、镁离子)
配制离散细胞的消化液和洗涤液时,宜用钙、镁离子含量低的或无钙、镁离子的溶液
可配制成10×浓度的贮存液,用时稀释
高压灭菌,冰箱保存
浑浊或沉淀时,应重新配制
Ringer、PBS、HanksorD-Hanks(无钙、镁离子)
NaHCO3液:常用浓度7.
培养基(培养液)是维持体外细胞生存和生长的溶液,分天然培养基和合成培养基。
无血清培养基的主要研制策略:在基础培养基中补充各种必需因子,如激素、生长因子、结合蛋白、贴壁和扩展因子等。
NaHCO3液:常用浓度7.
浑浊或沉淀时,应重新配制
玻璃蒸馏器制备的三次蒸馏水
EDTA:乙二***四乙酸二钠
基本培养基80%-90%
加血清(终浓度10%)
培养基粉末中一般都加入了酚红(当溶液酸性时pH小于呈黄色;
来自各培养室或文献报道证明哪些培养基对培养某种细胞较合适,作为自己应用的依据
当溶液碱性时pH大于呈紫红色),一种pH指示剂。
NaHCO3液
HEPES不是起维持pH恒定的作用,而是起恒定和抵抗快速pH变化的,所以调整pH常常用NaHCO3溶液。
基本培养基80%-90%
功效:①维持渗透压;②提供缓冲系统;
③提供水分和无机盐
要求:①和培养物来源的动物血清相似;②等渗
如:
平衡盐溶液:无Ca2+、Mg2+的缓冲液
PBS:


KH2PO4
加新鲜配置的三蒸水或去离子水水至1000ml
二、天然培养基
培养基(培养液)是维持体外细胞生存和生长的溶液,分天然培养基和合成培养基。
蛙胚延髓组织
培养在青蛙淋巴凝块内
天然培养基
血清:提供营养和生长因子,促进细胞生长繁殖,粘附及中和有毒物质
血浆:支持培养组织块及供给细胞生长的营养物质,现在不常用
组织浸出液:可用鸡胚胎浸出液,含大分子核蛋白质和小分子氨基酸,能促进细胞生长
水解乳蛋白:氨基酸含量高,由乳白蛋白质经水解得到淡黄色粉末,%溶液。
血清中的主要成分:
①多种蛋白质(白蛋白、球蛋白、铁蛋白等)
②多种金属离子
③激素
④促贴附物质,如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等
⑤各种生长因子
⑥其它不明成分
优点:营养成分丰富,培养效果好
缺点:
来源受限。
成分复杂,影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。
易发生支原体污染