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显微镜的使用和细菌的简单染色
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实验内容
显微镜介绍
油镜的使用原理
染色原理
目的要求
实验原理
实验材料
实验程序
作业
显微镜的使用
细菌简单染色的流程
实验原理——显微镜介绍
普通光学显微镜(NIKON)
欧林巴斯(OLYMPUS)生物显微镜
麦克奥林生物显微镜
显微镜的放大倍数和分辨率
=接物镜放大倍数×(两端)两点之间距离的能力,可用公式表示为:D=λ/2n·sin(α/2)式中D:物镜分辨出物体两点间的最短距离。:可见光的波长(m)n:物镜和被检标本间介质的折射率。:镜口角(即入射角)。
实验原理-油镜使用的原理
油镜,即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时,由于空气与玻片的密度不同,使光线受到曲折,发生散射,降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油(其折射率与玻片的相近),则几乎不发生折射,增加了视野的进光量,从而使物象更加清晰。
油浸没物镜
介质:左-空气;右-香柏油
实验原理-染色剂和染色原理
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由于微生物细胞含有大量水分(一般在80-90%以上),对光线的吸收和反射与水溶液的差别不大,与周围背景没有明显的明暗差。所以,除了观察活体微生物细胞的运动性和直接计算菌数外,绝大多数情况下都必须经过染色后,才能在显微镜下进行观察。但是,任何一项技术都不是完美无缺的。染色后的微生物标本是死的,在染色过程中微生物的形态与结构均会发生一些变化,不能完全代表其生活细胞的真实情况,染色观察时必须注意。
微生物染色的基本原理,是借助物理和化学因素的作用而进行的。物理因素如:细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。化学因素如:正负离子之间的相互吸引等。
实验原理-染色剂和染色原理
微生物染色常用染料如下表:
实验原理-细菌的三种基本形态
球菌(Sphericalcoccus):包括双球菌、链球菌、葡萄球菌、四链球菌、八叠球菌等
杆菌(Rod-shapedbacillus):短小、粗大、细长、棒状、分支
螺旋菌(Spired-shapedspirallum):弧菌、螺菌
实验材料
器材:显微镜、擦镜纸、吸水纸、载波片、盖玻片、接种环、酒精灯、废液缸、洗瓶等。
细菌形态的染色标本。
菌种:培养12—18h的枯草杆菌()、 大肠杆菌()、
金黄色葡萄球菌()
染色液和试剂:石炭酸复红、吕氏美蓝、香柏油、二甲苯(或者乙醇***溶液)等-
显微镜保养和使用中的注意事项:
,以免损坏。
,不能用手指或粗布,以保证光洁度,用完油镜必须进行“三擦”。
,必须依次用低、中、高倍镜,最后用油镜。当目视接目镜时,特别在使用油镜时,切不可使用粗调节器,以免压碎玻片或损伤镜面。
,两眼睁开,养成两眼能够轮换观察的****惯,以免眼睛疲劳,并且能够在左眼观察时,右眼注视绘图。
,一定要右手拿镜臂,左手托镜座,不可单手拿,更不可倾斜拿。
,以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。