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第10章酶的作用机制和酶的调节
一  酶的活性中心
(一)、活性中心(active site)的概念
活性中心:活性中心:酶分子中直接与底物结合并催
化底物发生化学反应的部位。
活性中心分为结合部位和催化部位
结合部位:负责与底物的结合,决定酶的专一性(与km有关)。
催化部位:负责催化底物键的断裂形成新键,决定酶的催化能力效率(kcat)和催化性质。
结合部位和催化部位也可以合二为一,活性部位可以提供调节部位,也可以为活性部位提供物质基础
酶的活性中心
(二)、 活性中心的结构特点:
(1%~2%)

-诱导契合
4. 酶活性部位位于酶分子表面的一个裂缝内,裂缝
内往往是个疏水的微环境。
,形成ES复合物。
,即酶与底物结合
时构象发生一定的变化才互补。
频率最高的活性中心的氨基酸残基:
Ser、His、Cys、Tyr、Asp、Glu、Lys。
酶与底物结合成ES复合物主要靠次级键:氢键、盐键、范德华力和疏水相互作用。----底物可以稳定酶!
酶的活性中心
(三)、研究活性中心的方法
化学修饰法通常是比较在底物或竞争性抑制试剂是否存在的情况下的化学修饰
1、酶分子侧链集团的共价修饰(化学修饰)法
酶的化学修饰法分类
(1)、非特异性共价修饰某些酶活性中心含有的活性基团在活性中心以外不存在或很少,这时可选择某些非特异性试剂进行修饰
(2)、特异性共价修饰如DFP(二异丙基***磷酸)可与活性中心中的丝氨酸反应。
如,DFP与胰凝乳蛋白酶作用(只和活性部位的丝氨酸残基的羟基结合)
(3). 亲和标记法
亲和标记(Affinity labeling):也属于共价修饰,主要是利用酶与底物特异性结合的原理而发展起来的一种特异性化学修饰法。(TPCK)修饰a-胰凝乳蛋白酶His57
何谓亲和层析?
Ks型不可逆抑制剂又称( ? )
研究活性中心的方法(续)
2、动力学参数测定法
活性部位氨基酸残基(解离状态)和(酶活性)直接相关通过动力学方法求有关参数,对酶活性部位化学性质作出判断。通过研究酶活性与pH关系,可以推测到与催化直接相关的某些基团的pK值,进而推测这些基团的作用
研究活性中心的方法(动力学分析法)
核糖核酸酶最适 PH =
参照最适PH值:谷氨酸、组氨酸或赖氨酸哪一个可能在活性中心?
胃蛋白酶的最适PH值为2,哪一类氨基酸可能在活性中心?