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复杂性疾病的分子诊断
几乎所有慢性粒细胞白血病(CML)患者都有染色体异常,属于染色体移位:t(9;22)(q34;q11),其发病的分子机制是产生BCR/ABL融合基因。
临床上以细胞学作为常规诊断方法,另外还可以用荧光原位杂交技术(Fish)和逆转录-PCR技术(RT-PCR)检测BCR/ABL融合基因。请你简述用Fish和RT-PCR两种方法诊断慢性粒细胞白血病(CML)时各自的优缺点。
慢性粒细胞白血病:是一种获得性造血干细胞恶性克隆性增生疾病。病程进展慢,临床以脾肿大、粒细胞显著增多、外周血及骨髓中出现大量中幼、晚幼粒细胞为特征。患者有慢性期、加速期、最终急性变期。
Fish和RT-PCR两种方法诊断慢性粒细胞白血病(CML)时各自的优缺点
1、FISH是通过根据已知的基因序列合成探针,并分别标上不同的荧光。这个探针就可以根据基因的序列去寻找它在染色体上的位置,并与之结合。由于每条探针上标记很多个荧光分子,在荧光显微镜下就可以看到明亮的信号。如果两个基因分别标上红色和绿色荧光,如果两个基因跑到一起去了(形成了融合基因),红色和绿色荧光跑到一起,就变成了黄色的荧光(即融合信号)。
A、要做常规的FISH检测,需要先确定检测的目的,选择不同基因的探针,并且只能对特定的基因进行分析。
B、一般的FISH检测需要指定基因特异性的探针,相对于染色体核型分析来说,可以更精确和更精细地对基因进行定位分析,但失去了核型分析的宏观性。
C、FISH对基因或融合基因的扩增也能较好地检测。
D、FISH检测一般最多和分析1000个细胞的荧光信号,检测灵敏度较核型分析高。
E、敏感性更高,但是设备要求高,费用高,而且发现不了可能存在的其它异常核型。
2、 PCR :BCR-ABL1融合基因虽然从核型分析上都是Ph染色体,看起来一样。但BCR-ABL1基因序列也有多种,而且从基因序列水平来看有很大差异。但BCR-ABL1融合基因的序列相对固定并有其规律,我们已经熟知了常见型BCR-ABL1融合基因的序列,因此可以根据基因序