番茄酱中番茄红素和β—胡萝卜素.doc

番茄酱中番茄红素和β—胡萝卜素
提取分离及分析测定
一、实验目的
1、理解有机溶剂提取番茄红素和β—胡萝卜素的方法及原理
2、掌握萃取分离过程的基本操作
3、掌握层析柱的操作
4、掌握分光光度法的测定色素含量的方法
5、掌握实验数据的处理及色素含量的计算方法
二、实验原理
番茄酱浓缩了番茄中的番茄红素和β-胡萝卜素,二者的结构均属于类胡萝卜素。因而在结构上极为相似。番茄红素结构化学式如下:
β-胡萝卜素结构化学式如下:
类胡萝卜素为多烯类色素,不溶于水而溶于脂溶性有机溶剂。本实验先用较高极性的溶剂提取较高极性的色素,同时脱去样品中的存在的少量水分;再用较低极性的溶剂补充提取较低极性的色素。因为低极性溶剂不与水混溶,故先除去水分后才能有效地从组织中较完全地萃取类胡萝卜素。根据番茄红素与β-胡萝卜素极性的差别,用柱层析可以将它们分离。
番茄红素在不同的有机溶剂里均有类似的吸收峰,最大吸收峰的波长在
500nm附近,将分离后的样品溶解在适当的溶剂中,在最大吸收峰处用分光光度
计测定溶液的吸光度;番茄红素标准品价格昂贵,且本身稳定性差,不宜长期保存。根据苏丹红(Ⅰ)在500nm附近和番茄红素、β-胡萝卜素具有相同的吸收特性,以苏丹红代替番茄红素作为标准品,用***仿作为溶剂及参比液,在500nm附近测定苏丹红的系列吸光度,绘制标准曲线;用番茄红素的提取液的吸光度值在此标准曲线上查取相应浓度,以此来表征番茄红素的浓度。通过换算得到番茄酱中该色素的含量。
β-胡萝卜素的含量采用色价的测定及计算方法。色价是色素在商业上的浓度计量方式,定义为单位质量原料的提取物在1%浓度、以1cm比色皿在其最大吸收峰处的吸光度。色价的特点是不需要校准样,也不需作标准曲线,简单快速。具体操作是取样品m克,在天平上准确称重,用Vml石油醚溶解,以石油醚作参比液,在λmax下测量样品溶液的吸光度A,样品色价E按下式计算:
三、物理常数
四、试剂和仪器
1、试剂及原料
亨氏番茄酱、95%乙醇()、二***甲烷()、石油醚(60-90℃)、***仿()、中性氧化铝()、***化钠()、无水硫酸钠()、苏丹红Ⅰ()
2、仪器
回流装置、恒温磁力搅拌器、层析柱(15cm左右内径为1-)、分析天平, 移液管、容量瓶、VIS-7220分光光度计
五、实验步骤
1、混合色素的提取
称取新鲜番茄浆[1]10g于50ml干燥的圆底烧瓶中,加极性的试剂(建议用95%乙醇)[A]20ml,摇匀,装上回流冷凝管及恒温磁力搅拌器,在相应温度的水浴中加热,回流5分钟,冷却后抽滤,滤液直接进入一个的50ml锥形瓶中。残渣转入原50ml圆底烧瓶中瓶内,加入15ml低极性溶剂(建议用二***甲烷)[A],在相应温度的水浴上回流5分钟,冷却,混合物常压过滤,滤液直接滤入以上50ml锥形瓶中,再加5ml低极性溶剂洗涤残渣,过滤。合并高极性提取液和两次低极性提取液,倒入100ml分液漏斗中,加4ml饱和***化钠溶液[2],振荡萃取,静置分层。分出较深色有机相后,使其流经一个在颈部装有疏松棉花且在棉花上铺有6g无水硫酸钠的漏斗,以除去其中的微量水份。再用5ml低极性溶剂洗涤干燥剂,合并干燥后所得的溶液于一