植物细胞骨架的光学显微镜观察.doc

几种不同类型显微镜的使用及其对胞质环流的观察
一、实验目的
学会使用相差显微镜,掌握暗视野技术,以及荧光显微镜等技术
二、实验原理
在活细胞中,原生质流动是细胞活力强弱的重要标志,它的产生与
细胞中微丝的作用是密不可分的。微丝的纤维较细,直径为5-6nm,
主要成分是肌动蛋白、肌球蛋白和原肌球蛋白,并像肌肉一样有收缩
功能。微管是由一种叫做微管蛋白的蛋白质组成的,位于原生质(静止
的)外质,紧靠在质膜之下,离运动的内质至少有1µm的距离,与胞质
川流运动无关,主要起保持细胞形状、承担细胞运动和细胞内物质运输
的作用。
另外,用秋水仙素与细胞松弛素B处理也可产生不同的结果。经
秋水仙素处理后,细胞的纤维被扰乱,但不影响川流运动,这是与秋水
仙素影响边缘微管作用有关。相反,用细胞松弛素B处理,就可抑制细
胞的川流运动,很明显,微丝担负着川流运动的功能。胞质环流需要消
耗能量,也受温度、渗透压以及离子浓度的影响。
三、实验材料
新鲜洋葱鳞茎,刚毛藻等。
四、实验器材
相差显微镜,普通光学显微镜,黑卡纸,载玻璃片,盖玻片,镊子,吸水
纸,剪刀,滴管,擦镜纸。
五、实验药品
100µg/ml秋水仙素溶液,20µg/ml细胞松弛素B(cytochalasin B),蒸馏水,香玻油,二甲苯。
六、实验步骤
取新鲜洋葱鳞茎内表皮约1cm2 或更小,放在干净的载玻片上,
加一小滴水,将盖玻片倾斜盖上,并注意不出现气泡,即制成水封片。
取一块黑纸,把它剪成暗视野显微镜用的遮光板,并放入普通
光学显微镜的聚光器下的光阑上,制成暗视野显微镜。(须反复调整遮
光板的尺寸以得到最佳效果)。
把制成的水封片放在暗视野显微镜下用10倍物镜观察,可以
看到在明亮的细胞壁与半透明的细胞核之间有很多极小而明亮的“质
点”或颗粒,仔细观察,可以看出这些正作有向的运动(速度很慢),
水封片中多加些水会促进这种运动。
学****相差显微镜,荧光显微镜和倒置显微镜的使用方法和有
关操作技术。
植物细胞骨架的光学显微镜观察
一、实验目的
掌握细胞染色的基本过程及非切片法制片技术,了解细胞骨架的
结构,学会制作永久封片。
二、实验原理
当用适当浓度的TritonX—100处理细胞时,因其非离子型表面活
性剂的特性,可以除去可溶性蛋白质和脂类,而微丝束属不可溶性蛋
白,就不会被TritonX—100破坏而保留在细胞中。当用考马斯亮蓝
R250染色时,在光学显微镜下通常能观察到以核为中心的纤维状骨
架,在质膜下还能见到丝状骨架,骨架上常附着一些与膜运动、整合有
关的蛋白质。
考马斯亮蓝R250并不是特异地显示微丝,但由于有些细胞骨
架纤维如微管等在该实验条件下不够稳定,又因有些类型的纤维太细
而在光学显微镜下无法分辨,因此看到的是由微丝组成的纤维束,直径
约在40nm左右。
三、实验材料
新鲜洋葱鳞状叶。
四、实验器材
普通光学显微镜,50ml烧杯,滴管,试剂瓶,载玻片,盖玻片,镊子,
染色板,吸水纸,擦镜纸。
五、实验药品
—缓冲液:所含各成分终浓度为50mmol/L眯唑,50mmol/L
KCL,,lmmol/LEGTA(乙二醇双(α—氨基乙基》醚
四乙酸), EDTA,lmmol/L巯基乙醇或二硫苏糖醇
<DTT)。lmol/L
2 (pH )

其中磷酸盐缓冲液配法: 49ml
5lml
3. 1%TrltonX—100,用M—缓冲液配制。
%考马斯亮蓝R250。配制用的溶剂为:甲醇:冰醋酸:水
(:7:)。·
5. 3%戊二醛溶液,()配制
6. 50%,70%,95%乙醇。
7. 叔丁醇
8. 正丁醇
9. 二甲苯。
。
六、实验步骤
1. 撕取洋葱鳞状叶内表皮约lcm大小,取若干片,置于装有pH
,用镊子轻按入使其浸没5min。
,用l%TritonX—100处理20—30min。
3. 吸去TrironX—i00液,用M-缓冲液洗3次,每次10min左右。
4. 用3%。
5. 再用磷酸盐缓冲液洗3次,每次10min。
6. %考马斯亮蓝R250染色20—30min(在染色板上)