Biacore3000动力学和亲和力实验的设计方法-亲和力和动力.doc

Biacore3000_动力学和亲和力实验的设计方法-亲和力和动力
亲和力和动力学基础知识什么是动力学和亲和力?
动力学
? 反应发生的速度? C 与时间相关

? 结合 C 分子间结合的速度

? 解离 C 分子复合物解离的速度

? 动力学分析能够确定在一个给定的时间跨度内,分子复合物是否能够结合
还是完全解离

亲和力
? 分子间结合的强度? C 与时间无关

? 亲和力分析能够确定反应处于平衡状态( 结合与解离形成动态平衡)时,
复合物的浓度

2 / GE Title or job number / 2009-7-20动力学分析和亲和力分析的相关性?
细胞本身就是一个动态系统 C 极少处在平衡状态

同样的亲和力,不同的反应,动力学数据一般并不相同
? 动力学数据提供了更多的信息

3 / GE Title or job number / 2009-7-20同样的亲和力,不同的动力学
-8
? 所有4个化合物的亲和力数据相同 K = 10 nM = 10 M
D

? 结合动力学常数可有不同数量级范围内的改变,本例中为4个数
量级

浓度= 1000 nM
浓度= 100 nM
所有靶位
点被占据

k k
on off
-1 -1 -1
(M s )(s )
6 -2
10 10
5 -3
10 10
4 -4
10 10
3 -5
10 10
30
60
30
60
min
min
min
min
时间
时间
4 / GE Title or job number / 2009-7-20
Response用Biacore获得动力学和亲和力数据的2种方式
监测结合和解离速率
? 亲和力动力学

监测稳态水平
?亲和力动力学

5 / GE Title or job number / 2009-7-201:1 动力学模型的速率方程
k
a
A B AB
B
k
d
A
d [AB]
k [A] [B]
Association:
a
dt
B
-d [AB]
k [AB]
A
Dissociation:
d
dt
Net rate equation:
d [AB]
k [AB]
k [A] [B]
d
a
dt
-1 -1
-1
M/s M s MM M
s
where
-1 -1
k association rate constant [M s ]
a
-1
k dissociation rate constant [s ]
d
6 / GE Title or job number / 2009-7-20平衡常数(Equilibrium constants)
At equilibrium:
Association Dissociation
k kd
[A] [B] [AB]
a
-1 -1 -1
s MM s M
M
The equilibrium constants:
k
[AB]
-1
a
K the equilibrium associationconstant [M ]
A
k [A] [B]
d
k
[A] [B]
d
K the equilibrium dissociation constant [M]
D
[AB]
k
a
7 / GE Title or job number / 2009-7-20Biacore中的平衡和动力学
k
a
A + B ? AB
k
d
A 是溶液中的待分析物(analyte)
? A的游离浓度由流动系统控制,在检测中保持恒定

AB 是结合复合物
? AB的浓度可通过直接检测RU得到,表示为R

B 是偶联在传感芯片上的分子
? 总浓度能用 RU表示, 相当于最大结合反应理论值 R

? B的游离浓度即 R-R

我们无需知道复合物和配体的实际浓度!
8 / GE Title or job number / 2009-7-20Biacore中的速率和亲和力
k
a
A B AB
k
d
d[AB]
k [AB]
k [A] [B]
d
a
dt
dR
k C [R R] k R
a d
dt
-1 -1 -1
M sMRU sRU
RU/s
A has one binding site and reacts with immobilized ligand
B has n identical