实验室酸乳的发酵实验的设计方案.doc

试验室酸乳的发酵
系别：生命科学学院 班级：090913 学号：****** 姓名：***
一、试验目的：
1、把握酸乳发酵菌种的分别纯化方法
2、了解乳酸菌的生长特征及生化特性。
3、学****试验室制作酸乳的〔结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄〕
MRS 培育基(g／L)：蛋白胨 10，酵母粉5，牛肉膏 5， 葡萄糖 20，柠檬酸二铵 2，吐温 80 1．0 皿，乙酸钠 25，K2HP04 2， MgS04·7 H20 0．58，MnS04·4H20 0．25，琼脂 20，pH 7．0 。
根底种子培育基(g/L)：葡萄糖30，酵母粉 5，蛋白胨5， MgS04·7H20 0．5，pH7．0～7．2。250 ml 的三角瓶装液量50ml， 115℃，高压蒸汽灭菌20 min。
根底发酵培育基(g／L)：葡萄糖90，酵母粉15，蛋白胨
5，MgSOr7H：O 0．5，CaCO ，40(干热160℃灭菌2 h 接种前加)。pH7．0～
3
7．2，115℃高压蒸汽灭菌20 min。
大豆蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、葡萄糖、乳糖、碳酸钙、琼脂、 蒸馏水。
仪器：无菌水〔20ml 带玻璃珠三角瓶〕，无菌培育皿 酒精灯、 石棉网、 接种环、高压蒸汽灭菌锅、 摇床、 超镜工作台、 光学显微镜、 75%酒精棉、 冰箱。
四、试验内容：
1、乳酸菌的分别纯化
(1)分别。取市售颖酸乳稀释10 - 1 ~10 - 5 ，取其中的10 - 4 、10 - 5 2
个稀释度的稀释液各 ~，分别接入脱脂乳琼脂培育基上，用无菌刮铲涂布棒依次涂布，或者直接用接种环沾取原液，平板划线分别，置 40℃下培育48h，如消灭圆形稍扁平的淡黄色菌落及其四周培育基变为黄色者，可初步定为乳酸菌。
(2)镜检：用接种环挑取乳酸菌典型菌落，制作装片，用光学显微
镜进展镜检，进展革兰氏染色，假设细胞呈杆状或链球状(两种外形的 菌种均分别选入)，且革兰氏染色呈阳性，则可将其接种到试管 MRS 培育基斜面上连续传代4~6 次，作菌种待用。
2、种子培育基的制备及灭菌：
按上面的配方配制根底种子培育基，调整 pH 值为 ~，115℃
20 min 进展高压蒸汽灭菌。
3、种子的制备：
取接种环挑取上述的菌种 2 环，接种于种子培育基上，150ml 的三角瓶 40ml 装量，置于摇床上，40℃，180r/min，培育18h。
4、发酵培育基的制备及灭菌：
按上述配方配制根底发酵培育基，调 pH 至 7．0～7．2，115℃ 灭菌 20 min，备用。
5、接种及发酵：
用液枪准确吸取种子液，接种到发酵培育基上，接种量为 5％， 250ml 三角瓶装量50ml，置于摇床上，45℃，120r/min，培育 72h。
6 、冷却与后熟
到达发酵终点的酸乳需进展快速冷却，以便有效地抑制乳酸菌 的生长，降低酶活力，防止产酸过度，减低和稳定脂肪上浮和乳清析 出的速度。
五、发酵的流程设计：
菌种的分别纯化®菌种的扩大培育〔种子液〕®接种到 250ml
三角瓶〔发酵液〕®45℃培育〔过程中要测定发酵液的OD 值、pH〕
®OD 值的测定〔推断发酵是否完毕〕