苹果酸、γ氨基丁酸对Hela细胞端粒酶活性影响的分析.pdf

中国医科大学
硕士学位论文
苹果酸、γ-氨基丁酸对Hela细胞端粒酶活性影响的研究
姓名:李咏
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:于成国
20050501
论文作者签名:.查壹�论文作者签名:�⑿��梗甋�甦��墼��中国医科大学研究生学位论文独创性声明中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。日期:校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导师为通讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国校可以公布学位论文的全部或部分内容�C苣谌莩��,以采用影印、缩印或其他手段保存论文。指导教师签名:本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学�‘
弧��—。。—��苹果酸、�话被�∷岫訦��赴�肆C�活性影响的研究�前端粒酶������是一种由��偷鞍字首槌傻暮颂呛说鞍酌福��够以自身的��D0澹�油泛铣扇旧�迥┒说亩肆��,弥补细胞分裂时端粒��亩JВ�映ず臀�侄肆5某ざ龋�瓜赴�倜�映ぁU�H颂�到,大多数永生化细胞和�%以上的恶性肿瘤细胞则可表达端粒酶活性。在恶性肿瘤中端粒酶的激活是细胞增殖失控的关键,因此,端粒酶已成为人们研究肿瘤和抗肿瘤药物的新靶点。及肿瘤的发生密切相关。苹果酸作为有氧代谢的促进剂,能够促进组织有氧氧化,加速线粒体呼吸。而肿瘤组织主要是以无氧糖酵解获取能量,有氧氧化不利于肿瘤细胞生长和恶化。�话被�∷����狝��������,���侵惺嗌窬�低衬谧钪匾5囊种菩陨窬�葜剩�匀颂寰哂卸�种有益的作用。近年的研究显示,某些氨基酸类神经递质在体外具有刺激或抑制恶性肿瘤细胞增殖的作用。��细胞�斯�卑┫赴�是研究端粒酶的常用细胞,本研究旨在观察苹果酸和��这两种作用因素对��细胞端粒酶活性的影响,探讨端粒酶活性的变化与二者在肿瘤细胞生长、代谢和恶化方面作用关系,为恶性肿瘤的治疗提供新的策略。实验材料与方法��笛椴牧���细胞株:��细胞,本实验室冻存,常规培养。中文论著摘要言细胞�巧�诚赴�中端粒酶活性的表达很低,用一般的方法几乎检测不端粒酶活性的调节可表现在不同水平上,经过实验证明抑制端粒酶的活性可以抑制肿瘤细胞的生长,所以端粒酶与肿瘤细胞的生长、繁殖、衰老·��、一一,
细胞培养及细胞计数:��端粒重复扩增法���结合电泳及银染法测定端粒酶活性:检测其端粒酶活性变化。结果显示苹果酸使��细胞的端粒酶活性降低,性于作用�时就有所下降,当作用��庇攵哉兆橄啾燃负跸陆盗薼�ィ�甚至在相对较低浓度��畊��疞�乱财鹱饔茫�����/�ǘ仁弊饔没���作用于��细胞不同时间,结果显示端粒酶活性于作用�时就有所下降,当作用��庇攵哉兆橄啾燃负跸陆盗��ィ��后端粒酶活性只有轻微的改变,但均低于对照组。��主要试剂和仪器:苹果酸、�话被�∷岷�一�一氨基乙酰�交�酰氯盐酸����华美公司�籔�试剂盒�毡綯�����;其它常规试剂均为国产分析纯。超净台,�:孵箱,�����⒗胄幕�琒���高速离心机�鹿�,����型��┰鲆����.英国�珼�一�偷缬�仪等。��笛榉椒���不同浓度苹果酸和�话被�∷岱直鹱饔糜贖��赴�煌�奔洌���细胞端粒酶的制备:��蛋白含量测定:��统计学处理结果��还�岫訦��赴�肆C富钚缘挠跋�将不同浓度的苹果酸����疞一����疞�饔糜贖��赴��后,甚至在相对较低浓度��畉��/�下也起作用,但以����疞浓度时作用活性最低。�����疞苹果酸作用于��细胞不同时间,结果显示端粒酶活随后端粒酶活性只有轻微的改变,但均低于对照组。�瓽��訦��赴�肆C富钚缘挠跋�将不同浓度的����.��疞一����疞�饔糜贖��赴��后,检测其端粒酶活性变化。结果显示��使��细胞的端粒酶活性降低,性最低。���疞��·��
讨论随每一轮��粗扑�ナУ亩肆V馗葱蛄小���赴�人宫颈癌细胞��为一种恶性肿瘤细胞,其端粒酶被激活从而维持端粒长度阻止细胞死亡,端粒酶活性作为衡量某些肿瘤恶性程度的一个指标。然而,目前人们对端糙苹果酸作为人体代谢过程产生的重要有机酸,是三羧酸循环的中间代谢产物,补充苹果酸能够促进组织有氧代谢,加速线粒体呼