端粒酶活性对sgc7901胃癌细胞活性的影响.doc

端粒酶活性对SGC7901胃癌细胞活性的影响【摘要】目的探讨端粒酶活性对SGC7901胃癌细胞活力的影响。方法SGC7901细胞分组培养,其中对照组不施加处理因素,其余各组给予端粒酶抑制剂叠氮脱氧胸苷(AZT)即AZT-4、AZT-8及AZT-16组,分别给予AZT4、8及16mmol/L,24、48及72h后以甲基噻唑基四唑(MTT)法检测各组细胞活力,根据MTT实验结果检测AZT抑制SGC7901细胞活力最明显时各组细胞端粒酶活性。结果AZT可抑制SGC7901细胞活力,呈时间依赖性及剂量依赖性。72h后AZT-4、AZT-8及AZT-16组端粒酶活性下调率分别为(±)%、(±)%、(±)%,呈明显的剂量依赖性。结论端粒酶活性增强是SGC7901胃癌细胞永生化的重要机制之一。【关键词】端粒酶;SGC7901胃癌细胞;细胞活力胃癌严重威胁着人类的健康,但发病机制不清,仍无有效治疗手段。端粒-端粒酶体系在肿瘤的发生发展中发挥重要作用,端粒酶的激活导致了端粒的延长,而端粒的延长则促进了肿瘤的永生化,但仍有10%的肿瘤细胞端粒酶无活性增高表现[1]。叠氮脱氧胸苷(3-azido-deoxythymidine,AZT)可抑制端粒酶活性,进而阻止端粒的延长,从而抑制肿瘤的永生化。因此,本实验拟利用AZT探讨端粒酶活性对胃癌细胞株SGC7901存活率的影响,探讨端粒-端粒酶体系在SGC7901细胞增殖分化中的作用。(中科院上海细胞库),DMEM高糖培养基及胎牛血清(Gibco公司),AZT(sigma公司),甲基噻唑基四唑(MTT,南京建成生物工程研究所),TRAP-ELISA端粒酶活性试剂盒(Roche公司),酶标仪(北京普郎克公司)。×104/孔的密度铺于96孔板,细胞贴壁后分组培养,对照组(MDEM培养基+10%胎牛血清),AZT-4、AZT-8及AZT-16组分别添加AZT4、8及16mmol/L,通过MTT实验确定AZT抑制SGC7901细胞增殖的最佳浓度及时间,再利用TRAP-ELISA法检测该条件下AZT对SGC7901细胞端粒酶活性的影响。、48h及72h后,以无血清培养基继续培养4h,每孔分别加入20μlMTT(5mg/ml),孵育4h后弃去培养液,加入150μl二甲基亚砜振荡15min,以酶标仪检测吸光度(A值),根据公式计算细胞活力:检测组A值/对照组A值×100%。-ELISA法检测端粒酶活性根据MTT实验结果,检测最佳抑制时间各组SGC7901细胞端粒酶活性。收集细胞,根据试剂盒说明建立PCR反应体系,以Ct值(cyclethreshold)判断端粒酶活性值,Ct值小表示模板数大,端粒酶活性高,根据公式计算端粒酶活性下调率=(实验组平均Ct值-对照组平均Ct值)/对照组平均Ct值×100%。,AZT可抑制SGC7901细胞活力,具有明显的时间依赖性及剂量依赖性,其中AZT作用72h对SGC7901细胞存活率影响最为显著,因此本研究检测了72h后各组细胞端粒酶活性(表1)。2.