苯那普利对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响.doc

苯那普利对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响
宋秀荣1 王永2 (1包头市中心医院心内科 014040;2包头市中心医院体检科 014040)
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2012)9-0251-02
【摘要】目的探讨苯那普利对缺氧/复氧(HR)诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法采用纯化的乳鼠心肌细胞复制缺血再灌注模型。实验分3组:正常对照组,单纯缺氧复氧组(HR),缺氧复氧+苯那普利组(1×10-6mol/L)。细胞缺氧1h复氧2h后取细胞培养液测定乳酸脱氢酶(LDH)的活性,取细胞测定超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,并用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果 HR组SOD活性低于对照组, LDH、MDA含量、细胞凋亡率均高于对照组,与对照组相比均有显著差异(P<);在苯那普利用药组,SOD活性高于HR组,MDA含量、细胞凋亡率均显著低于HR组,P<。结论苯那普利对HR损伤诱导的乳鼠心肌细胞凋亡有抑制作用。
【关键词】缺氧心肌细胞自由基细胞凋亡
苯那普利是血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI),已有研究表明它能有效清除氧自由基,在缓解氧化应激、减少脂质过氧化中均有明显的心肌保护作用[1,2]。而细胞凋亡在心肌缺血再灌注损伤中具有重要的病理生理学意义。本实验旨在通过对乳鼠心肌细胞造成缺氧/复氧损伤,模拟心肌缺血/再灌注损伤模型,探讨苯那普利对心肌细胞凋亡的影响及其可能的机制。
1 资料和方法

-3天的SD大鼠,雌雄不限,由包头医学院实验动物中心提供。
CO2孵育箱(USA);XD-101型倒置显微镜(南京江南光电集团股份有限公司);79-1磁力加热搅拌器( 江南金坛电视大学应用电子厂); 800型离心沉淀器(上海手术器械厂);751分光光度计(上海第三分析仪器厂);日历7510全自动生化分析仪。
试剂与药品 DMEM低糖培养基、胰蛋白酶(1:250):北京华美公司;新生牛血清:杭州四季青生物工程研究所;SOD及MDA试剂盒:南京建成生物制品有限公司;苯那普利:北京诺华制药厂;细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC\PI Reagent Kit)购自法国IMMunotech公司。其它试剂均为国产分析纯。
实验方法
乳鼠心肌细胞原代培养
取出生2~3天的SD大鼠(每批约10~20只),无菌操作取出心脏,%的胰蛋白酶消化,分离。将细胞浓度调整至1×106ml-1,分装于培养瓶中,置孵箱中培养60min,用差速贴壁法纯化心肌细胞后再培养。每2~3天换一次培养液。在培养3-4天制作缺氧复氧模型。
实验分组实验分为A组:正常对照组,B组:单纯缺氧复氧组,C组:缺氧复氧+苯那普利组组(1×10-6 mol·L-1)。苯那普利在缺氧复氧期均给药。
缺氧复氧模型的建立采用Koyama等[3]方法配制缺氧(缺血)液和复氧液(、、、、乳酸钠40、HEPES20