生化制备技术实验操作指导.doc

生化制备技术实验操作指导
温州大学生命与环境科学学院
2012年2月
实验须知

(1) 实验课须遵守实验室开放时间,应自觉遵守课堂纪律,严禁在实验室吃东西、大声喧哗等行为。每组成员可按个人时间协作完成实验过程,但必须每位成员都参与到实验当中,并由组长预先提交实验分工安排书,交予指导教师作为签到依据。
(2) 使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约, 应特别注意保持药品和试剂的纯净, 严防混杂污染。
(3) 实验台、试剂药品架必须保持整洁, 仪器药品摆放井然有序。实验完毕,需将药品、试剂排列整齐, 仪器洗净倒置放好, 实验台面抹拭干净, 经教师验收仪器后, 方可离开实验室。实验仪器为配套使用,不可随意调换。每组组长在实验进行之前及结束之后负责对仪器和耗材进行清点,及时反映问题。
(4) 使用和洗涤仪器时, 应小心谨慎, 防止损坏仪器。使用精密仪器时, 应严格遵守操作规程, 发现故障应立即报告教师, 不要自己动手检修。
(5) 在实验过程中要听从教师的指导, 严肃认真地按操作规程进行实验, 并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上。课后写出实验报告, 实验课程完全结束后由学****委员收齐交给教师。
(6) 仪器损坏时, 应如实向教师报告, 认真填写损坏仪器登记表。
(7) 实验出现问题,不建议盲目重做,应及时总结原因,给出合理解释。实验课不完全以最终实验结果为评分依据,更重要的是考察分析问题和解决问题的能力。
(8) 每次实验课安排同学轮流值日, 值日生要负责当天实验的卫生和安全检查。

实验课前应认真预****实验内容,将实验名称、实验原理、实验内容和步骤等简单扼要写在记录本上。实验记录本要标明页码,不能随意撕掉任何一页。实验中使用的试剂纯度和终浓度以及使用的仪器类型等都要记录清楚。实验中观察到的现象、结果和得出的数据,应及时直接记在记录本上,绝对不可以随意记在单片纸上。原始记录必须准确、简练、清楚。

实验结束后,应及时整理和总结实验结果, 写出实验报告。
标题
标题应包括实验名称、实验时间、实验室名称、实验组号、实验者及同组者姓名、实验室条件。
实验目的
实验原理
应简述基本原理,不要完全照抄实验指导书。
操作步骤
操作步骤(或方法)可以采用流程图的方式或自行设计的表格来表达。
实验结果
将实验中的现象、数据进行整理、分析,得出相应的结论。建议尽量使用图表法来表示实验结果,这样可以使实验结果清楚明了。
讨论
包括对实验结果及观察现象的小结、对实验中遇到的问题和思考题的探讨以及对实验的改进意见等。

实验预****情况(20%)
实验操作情况(20%)
实验报告情况(20%)
——亲和层析法纯化胰蛋白酶
实验一鸡卵粘蛋白的提取
【实验目的】
掌握鸡卵粘蛋白的基本性质以及提取、分离和纯化的基本原理和方法;学****鸡卵粘蛋白对胰蛋白酶抑制活性测定的基本技术
【实验原理】
鸡卵粘蛋白是由四个分子量相近的亚基组成的糖蛋白,相对分子量在28000 Da左右,糖基部分主要含有D-甘露糖, D-半乳糖, 葡萄糖***, 唾液酸,-。鸡卵粘蛋白在鸡蛋清中含量丰富,并且与鸡卵清蛋白性质相比,具有较好的化学稳定性。在80℃条件下,理化性质不发生改变;在50%的***溶液中,能保持良好的溶解度;在10%的三***乙酸的溶液中不发生沉淀;, 。
表1. 鸡卵粘蛋白在10%TCA溶液中的溶解度
溶液 pH
鸡卵粘蛋白
鸡卵清蛋白
=
沉淀5%
溶解95%
沉淀95%
溶解5%
<
沉淀↑
溶解↓
沉淀↑
溶解↓
>
沉淀↓
溶解↑
沉淀↓
溶解↑
通过选择合适的pH值、三***乙酸浓度和***浓度,可以从鸡蛋清中获得鸡卵粘蛋白的粗体液。,鸡卵粘蛋白和清蛋白在不同pH值的10%TCA溶液中具有不同的溶解状态。由于鸡卵粘蛋白具有良好的稳定性,%三***乙酸溶液中鸡卵粘蛋白能保持良好的溶解度,而与其共存的清蛋白绝大部分被沉淀出来,这样就可以初步将二者分开。溶解在10%的三***乙酸中的鸡卵粘蛋白通过***沉淀而获得粗品,再经阴离子交换柱色谱进一步分离纯化就可获得较纯的鸡卵粘蛋白。

【器材与试剂】
器材
pH酸度计(pH试纸)、磁力搅拌器、圆环、玻璃漏斗、低速离心机、50 ml离心管、滤纸、真空干燥器、循环水式真空泵、储液罐、色谱柱(30×3 cm、20×3 cm)、抽滤瓶、胶塞、恒流蠕动泵、紫外检测仪、记录仪、自动部分收集器、铁架台、双拧丝、万能夹、透析袋、透析袋夹