1.2基因工程的基本操作程序(评估课).ppt

基因工程的基本操作程序
基因工程基本操作的四个步骤
目的基因的获取
基因表达载体的构建
将目的基因导入受体细胞
目的基因的检测与鉴定
一、目的基因的获取
1、目的基因:主要是指编码蛋白质的结构基因,也可以是一些具有调控作用的因子
2、获取方法:
①从基因文库中获取
②利用PCR技术扩增目的基因
③通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成
3、基因文库相关概念:
基因文库:
将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(gene library)
基因组文库:
包含了一种生物所有的基因的基因文库
部分基因文库:
包含了一种生物的一部分基因的基因文库,例如cDNA文库
基因文库的构建模式图
通过对受体菌的培养而储存基因
DUCK179制作
如何从基因文库中得到所需要的基因?
目的基因的有关信息依据:
基因的核苷酸序列
基因的功能
基因在染色体上的位置
基因的转录产物mRNA
基因翻译产物蛋白质
基因组文库和部分基因文库(cDNA文库)比较
①概念:PCR全称为_______________,是在生物____复制________ ___的核酸合成技术
③条件:_______________________、
_______________、___________ (做启动子)、
__________ 等
前提条件: 。
②原理:__________
④数量变化:以_____方式扩增,即____
⑤结果:
聚合酶链式反应
体外
特定DNA片段
DNA复制
目的基因的核苷酸序列
四种脱氧核苷酸
一对引物
TaqDNA聚合酶
指数
2n
在短时间内扩增目的基因
4、利用PCR技术扩增目的基因
双链的解开
⑥过程: 变性-退火-延伸-多次重复
a、DNA变性(90℃-96℃):
双链DNA模板在热作用下,_____断裂,形成___________
b、退火(复性55℃-60℃):
系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部________。
c、延伸(70℃-75℃):
在Taq酶的作用下,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的________。
氢键
单链DNA
双链
DNA链
DNA合成仪