PD-L1转基因细胞的构建及功能性鼠抗人PD-L1单克隆抗体的研制.pdf

苏州大学
硕士学位论文
PD-L1转基因细胞的构建及功能性鼠抗人PD-L1单克隆抗体的研
制
姓名:徐宽枫
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:张学光
20040501
.————————单克隆抗体的研制摘中文要铮ダ祭锼苄┧芩鼙谀ǘ檑员谯拥妗里:苎苎一途径作为经典的协同刺激途径,己受到广泛深入的研究。最近超家构域相互结合,将所产生的信号传至一膊康腎免疫受体酪氨酸抑制基序诿庖哂Υ鹬校訲、馨拖赴胺橇馨妥橹⒒又匾5母和骺苗,对自身免疫病或肿瘤进行免疫干预性治疗。;蛳赴第一部分——转基因细胞的构建。利用姆椒ù尤诵腸目庵扩增出—,最终转染细第二部分——探讨藕旁赑体外激发体系中对人外周血赴男结果表明—转基因细胞在し细胞增殖的培养体系中,具有显著下调细胞活化表型,抑制赴訮僭鲋车姆从π裕庵忠种菩вτ肫渥瓒隙∠赴族新成员—的发现,为协同刺激途径开辟了新思路。.被证实是一氖芴澹ü隒易逍鲁稍盤的作用。,在机体的免疫应答中发挥正性调节作用。有研究证明该途径在自身免疫病或肿瘤免疫中发挥重要作用,因此可通过制备特异性抗—单抗或其可溶性抑制因子,对该途径进行阻断,以增强鄙税细胞的功能;,设计抗原特异性病毒载体疫的构建和其单抗的研制,,,加入转基胞—/混合培养;免疫荧光标记和流式细胞仪分析赴硇图跋赴芷冢’猅掺入法观察赴脑鲋常籈法检测赴訧和牟身免疫病、肿瘤发生的关系。同调节作用。采用痬
第四部分—タ苟訮甃藕旁赥细胞增殖和发育成熟中的生物第三部——分鼠抗人甃タ沟难兄啤@酶弑泶锶薖狶肿拥于/细胞周期及使活化赴置贗和畒的水平下降有关。。小鼠的脾脏细胞与小鼠在氯诤希咏涣鱿赴贖选择培养基下培养】熳笥摇O群笫褂肞甃疞蚔甃赴I秆∠赴捎眉浣用庖哂ü。阳性克隆经有限稀释法多次亚克隆直至所有培养孔中的杂交瘤上清皆为阳性。实验先后共融台块孔板,筛选后有孜7置诳固逖粜钥祝床夂蠡袢株持续分泌特异别—。抗原位点竞争抑制实验提示康タ箍梢圆糠忠种粕唐坊膍达谱。结果表明该单抗可以进行细胞表面分子的检测和免疫组化的标记,。结果提示,,且该效应是剂量依赖性的。同时对各组赴谋硇徒屑觳猓峁可以显著上调赴鸌姆置诹浚ǘ訧和的分泌影响甚微鲇嗅./细胞为免疫原按照常规方案免疫周龄/∈蟆<し⒚庖吆螅抗体的杂交瘤株,为,8顾偷タ男Ъ鄯直鹞猯:。经纯化后抗体的蛋白含量平均为痬/腹水。産治鱿允荆株抗体都可以特异性识别./细胞上的大约大小的蛋白质,而不能识——一与./细胞上抗原位点的结合。采用流式细胞术和免疫组化,通过测定抗体与不同细胞和细胞株以及组织的结合,。哂写俳鳷细胞活化的作用:ḿ觳饨峁崾镜タ拇碳弱的下调业タ墓δ苁峭ü嫦蛐藕诺淖饔美捶⒒拥摹M痹谖闯墒霥中加入单抗后,同样通过逆向信号的传递导致成熟滞后和表面协同刺激分子表达的改变,进而影响的功能。
,该单抗能通过逆综上所述,本研究成功构建了稳定高表达—分子的转基因细胞株—/,并首次发现—信号能抑制榈嫉腡细胞活化诱导凋亡。同时向信号,诱导赴脑鲋澈虸姆置冢⑶夷芤种撇怀墒霥姆⒂墒旌鸵些协同刺激分子的表达。本研究所取得的创新性成果,、与免疫疾病的关系、⑻峁┝死砺垡谰莺褪笛榛关键词:,—,,赴タ寺】固澹蜃H荆逆向信号硕士研究生:徐宽枫导师:
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日期:盈嵯幺,日期:芝行:苏州大学学位论文独创性声明及使用授权声明表或撰写过的研究成果,也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的