PCR技术及应用PPT课件.ppt

分子生物学与临床
目录
PCR的概念
PCR技术的创建
PCR的原理
PCR的反应体系和方法
PCR的类型和应用
多聚酶链式反应
(PCR:Polymerase Chain Reaction)
Polymerase: DNA聚合酶
基因组DNA
引物
DNA聚合酶
DN***段体外扩增
PCR技术的创建
Kary B. Mullis(穆利斯(美))
Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。 1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现。
1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶(Taq)引入了PCR技术
1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。
三篇重要论文
The Unusual Origin of the Polymerase Chain Reaction (Scientific American, 1990,262(4):56-61, 64-5 )
Primer-directed Enzymatic Amplification of DNA with a Thermostable DNA Polymerase (Science,1988,239(4839):487-91 )
Specific Synthesis of DNA In Vitro via a Polymerase Catalyzed Chain Reaction (Methods in Enzymology, 1987,155:335-50 )
Taq DNA聚合酶(thermus aquaticus)
酶活性(%)
温度(℃)
40 50 60 70 80 90 100
100
80
60
40
20
PCR技术的原理
1 PCR技术的基本原理
无细胞分子克隆法:在微量离心管中,加入适量的缓冲液, 微量的模板DNA,四种脱氧单核苷酸,耐热性多聚酶, 一对合成DNA的引物,通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环,每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍,一般样品是经过30次循环,最终使基因放大了数百万倍; 扩增了特异区段的DNA带。