人CL-L1基因片段的原核表达 纯化及多克隆抗体的制备.docx

郑州大学 2 0 09 届硕士研究生论文人 C L ~U 基因片段的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
P ro ka ry o tie e x P re ss io n ,P u ri n e a tio n o f h u m a n C L ·L l
N e c k- C R D fr a g m e n t a n d th e P o ly c lo n a l a n tib o d y P ro d u c tio n
P o stg r a d u a te : Y u e Y i n g
Tu tor: Li Fu gU an g Liu Zh anju
A b str a C t
B a ckg rou n d an d o bjective: H um an eolleetin liv er l (C L L I) 15 a new m em b er of e o lle c tin f am ily , a n d f irst e lo n e d b y o h ta n i. C L L I 15 d e d u e e d to h a v e ty P ie a l str u e tu ra l e h a ra e te ristie s o f e o lle e tin s , e o n sists o f f o u r re g io n s : N 一te r m in a l
e y stin e 一rie h re g io n ,e o lla g e n 一lik e re g io n ,n e e k re g io n a n d e a rb o h y d ra te 一r ec o g n itio n dom ain (C R D ). M ost of eollectins are seereted Protein s,Playin g an im Portan t ro le in im m u n o lo g ic a l d e f en e e th ro u g h a g g re g a tio n ,e o m P le m e n t a e tiv a tio n ,o P so n iz a tio n ,
a e tiv a tio n o f P h a g o e y to sis,a n d in h ib itio n o f m ic ro b ia l g ro w th ,a n d 50 o n . C L L I 15 th e o n ly e y to P la sm ie P ro te in ,w e u n d e rsta n d v e ry little a b o u t its str u e tu re ,e x P r essio n sP e c tr u m in b o d y tissu e s a n d f u n c tio n . T O in v e stig a te its str u c tu re , e x P re ssio n
sP e e tr u m in b o d y tissu e s a n d f u n c tio n ,w e n e e d to o b ta in P u r if ie d re c o m b in a n t N e e k 一C R D f ra g m e n t o f h u m a n e o lle e tin liv e r 1 a n d P re P a re P o ly e lo n a l a n tib o d ie s .
M e th o d s : T h e ta r g e t g e n e f ta g m e n t w a s a m P lif ie d f ro m th e e o n st ru c te d
P e D N A 3 .1 /m y c 一H is一C L- L I v e cto r in e lu d in g fu ll lo n g C L L I g e n e ,a n d w a s in se rte d in to e lo n in g v e e to r P T 7 b lu e . T h e ta rg e t f ra g m e n t w a s o b ta in e d f to m re e o m b in a n t P T 7 b lu e加 E C K 一C R D △ K d ig e ste d b y re strie tio n e n d o n u e le a s