鸡贫血病毒vp1基因克隆、原核表达纯化以的多克隆抗体制备.pdf

⋯字:垂彩磊㈣㈣。。昴日姑戛耗礼袈奉巳南辟潞独创声明学位论文版权使用授权书国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被奄阅和借阅。本人授权—堂果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表明的,本栏可空蚱渌逃沟难换蛑な槭褂霉牟牧稀S胛乙煌ぷ鞯耐径本学位论文作者完全了解堂控有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向撞一可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ导师签字签字日期:本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成或撰写过的研究成果,也不包含为获得ⅲ喝缑挥衅渌枰L乇鹕本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名;学位论文作者签名:‘●。
中文摘要是鸡传染性贫血病辪,的瘸原。蜃楣埠腥隹7哦谅肟颍直鸨嗦隫..和值鞍住F渲蠽蛋白是奈ㄒ灰驴堑鞍祝荲的辅助蛋白,能帮助纬烧返墓瓜螅呦嗷バ鞑拍苡盏蓟产生免疫保护作用。渤频魍鏊兀芤鹣赴蛲觯隒的致病性有关。本课题第一部分在获得ɑ蜃榈幕∩希紫雀軬中滨分离株基因组序列,设计出针对全长的引物和小片段的引物,利用椒ù邮笛槭仪捌诠菇ê貌⒉┰龀蛉ǔず蚔小片段髯运盖泻蠼ǔず托∑位虬凑照返、蚿玫胶琕基因全长的’刈樽雍秃琕片段的、蚿重组子,转化大肠杆菌惺芴赴⒍跃股爻醪缴秆〉闹刈樽咏兴盖屑和序列鉴定。将双酶切鉴定正确并且测序结果与蛐蛄型耆恢碌阳性重组质粒转化大肠杆菌表达菌妗盏贾刈榈鞍妆达。经和检测后发现含蛉ǔず蚔小片段的重组子诱导菌无明显融合蛋白表达,而含蛐∑蔚刈樽佑盏季蟹肿恿吭的融合蛋白表达,与预期分子量大小一致,并且表达蛋白大部分以包涵体形式存在。鉴定,融合蛋白与タ鼓芄唤岷希炕龅牡鞍拙璓透析后浓缩,进行甈缬荆悸硭沽晾度旧ê笄薪骸=邢潞康牡鞍椎慕河肞溶解研成匀浆后液氮冻融三次,与佐剂乳化制各抗原免疫动物,。利用经比例稀释的抗血清作为一抗做的蛋白质印迹的结果显示,在ど咸匾煨缘南允境隽朔肿恿吭嘉的蛋自条带。综上所述,重组质粒能够成功地在大肠杆菌表达菌斜泶锍瞿康牡鞍祝渌菇ǖ闹刈樽游醇飨员泶铮竦玫闹刈橹鸡贫血病毒∞咖【读码框克隆到原核表达载体利用目的蛋白的多聚组氨酸尾巴进行镊柱亲和层析纯化融合蛋白,经山东师范大学硕士学位论文
粒.’表达的融合蛋白与预期大小相同。利用亲和层析纯化后的蛋白制备抗原,,为后续制各单克隆抗体进而更精确的检测鸡传染性贫血病提供了良好的抗原来源,也为研究肫渌鸆蛋白之问的相互关系奠定另外,本课题的第二部分着重研究了鸡贫血病毒间的同源重组。囊糯ū异性是极其有限的,同源重组是闹匾;浦弧R虼搜芯壳宄间是否存在着同源重组、同源重组在嫌惺裁醋饔茫欠浅V匾5摹N颐谴刑粞×死醋允澜绺鞯胤掷氤龅腃全基因组序列共个,对它们进行系统发生的分析,构建系统进化树,并使用砑贫铣鲆伤频闹刈樾蛄校缓笥姆椒ɡ慈范ㄕ庑┬蛄兄惺欠裾娴拇嬖谕粗刈椤>鲜鲅芯课颐鞘次发现的一个新的基因型,并且找到了序列可能的亲本序列和∞。这意味着同源重组在匀蝗禾宓囊糯ǘ嘌陨戏⒒幼畔嗟敝匾5关键诃:鸡贫血病毒,颍蚩寺。吮泶铮粗刈中图分类号:了基础。作用。山东师范大学硕士学位论文
“酬。衖黳:《.￡,:。,..。∞、.面裠辌餭瓻山东师范大学硕士学位论文瓹鴄琣瓵甌甌丘甧襯鞻℃.℃ⅲ
鰅賡╒坐垄塑堕盔兰堡主堂垡丝兰℃.,辝::.℃甊畊瓵,,/.詒瓵,
鸡贫血病毒的分子生物学研究进展⑾趾兔珺⒋拘云堆W酆现壮鷌珻谴怪贝úッ庖咭种菩约膊∫患Υ,的病原。腥究梢鸸撬柙煅W橹胸腺等淋巴组织萎缩,从而导致严重贫血,甚至造成死亡“盋感染还能导致免疫抑制”“。桓腥炯突鸺α云渌堇嘁话悴辉斐筛腥尽F涓腥究梢起芰湟韵碌某μ乇鹗侨饧ΤΨ⒉〔⒃斐山细叩乃劳雎剩猿赡昙σ话悴灰明显的临床症状,但严重的暂时性免疫抑制导致的继发感染和生产能力下降却可以造成难以估计的经济损失”。自年日本学者取首次报道该病毒以来,西德、瑞典、英国、丹麦、波兰、美国、澳大利亚、荷兰、巴西和阿根廷等国先后发现该病毒的存在““”。我国于年首次在黑龙江省分离到啊保婧笤诤幽稀⑸蕉ā⒔铡⒘赡⒓,在产蛋鸡群和***群,甚至在θ褐蠧抗体也相当普遍,许多地区鸡群中固宓募斐雎矢叽ヒ%,说明该病在世界范围内广泛分布,正在直接和间接地对世界养禽业造成巨大年日本学者取啊贝踊疾〉娜饧θ褐蟹⑾至苏庵帜苁日龄的雏鸡严重贫血并具有传染性的病毒。其引起的主要病变特征是再生障碍性贫血、皮下和肌肉出血、