血管内皮生长因子体外诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞.pdf

汕头大学医学院硕士学位论文
中文摘要

背景与目的
已有许多文献报道骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)在一定的体外条
件下能分化为神经元样细胞。然而目前用以诱导BMSCs分化为神经元样细胞的诱导剂很少
被应用于临床。研究者们对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)
体外诱导BMSCs分化为神经元样细胞的影响和作用机制还了解甚少。本实验旨在探索
VEGF体外对BMSCs分化为神经元样细胞的影响作用,并确定实验中VEGF的最佳的诱导浓
度。
方法
(1) BMSCs 取自 6~8 周雄性和雌性 Sprague-Dawley 大鼠体内。细胞传代至第 3 代时,
流式细胞分析鉴定 BMSCs 表面干细胞标志物 CD90 和造血干细胞标志物 CD45。
(2) BMSCS 经传代 3 次后经 10ng/mL 碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth
factor,b-FGF)预诱导 24h。细胞被随机分为 5,10,和 20ng/mLVEGF 处理组和未经
VEGF 处理的对照组。倒置相差显微镜(×200)下逐日观察细胞形态变化。
(3) 诱导后的第 3 天和第 10 天采用免疫组织化学方法鉴定神经元标志物神经特异性烯
醇化酶(neuron specific enolase,NSE),分别计数每 20 个随机视野下 NSE 阳性细胞总
数。
结果
(1) 培养第 3 天可见贴壁细胞,细胞形态各异,以圆形为主,少部分细胞呈三角形、梭
形,有粗短突起。原代第 7~10 天,较多梭形细胞形成集落生长。传代培养 2~3
代后细胞形态变得较均一,细长梭形细胞较多,呈漩涡样生长,部分细胞呈扁平形。
(2) 流式细胞分析结果示第 3 代 BMSCs 细胞表面干细胞标志物 CD90(%)阳性,而造
血干细胞标志物 CD45 阴性。
(3) 诱导第 3 天经 5,10,和 20ng/mLVEGF 诱导的组别均可观察到细胞胞体回缩,呈锥形
或圆形,胞体折光性增强,伸出较细长双或多极突起,并分出次级突起。而对照组
则无此类似现象出现。
(4) 诱导第 10 天,经 10ng/mLVEGF 处理的组别 NSE 阳性细胞数最多(P<)。诱导第
3 天和第 10 天,对照组中 NSE 阳性细胞数均最少(P<)。诱导第 10 天各组 NSE
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阳性细胞数目均较第 3 天增多(P<)。
结论
(1)在一定条件下,大鼠骨髓基质细胞体外可向神经元样细胞分化。
(2)本实验中 VEGF 能促进骨髓基质细胞体外向神经元样细胞分化;与 5 和 20ng/mL 相
比,10ng/mL 为最合适的浓度。
(3)VEGF 可能具有应用于诱导 BMSCs 体外向神经元定向分化和修复中枢神经损伤和神
经变性疾病的潜能。

关键词:血管内皮生长因子;骨髓基质细胞;神经元样细胞;细胞分化;神经再生。
















IV
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Abstract

Background and objective
Studies have demonstrated that bone marrow stromal cells (BMSCs) undergo neuronal
differentiation under certain in vitro , very few inducers of BMSCs neural
differentiation have been used in clinical effects and mechanism of vascular
endothelial growth factor (VEGF) on neural differentiation of BMSCs in vitro remain poorly
this experiment,we aimed at investigating the effect of VEGF on inducing BMSCs
into neuron-like cells in vitro, and at determining the best VEGF concentration