浅谈水环境中隐孢子虫和贾第鞭毛虫的检测方法.pdf

专业技术论坛·Professional Technology68 科学时代2015 年第 02 期一、隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测的改进方法传统方法在使用过程中逐渐暴露出检出率低、重现率差、过程复杂、成本昂贵等缺陷,笔者通过工作实践开始在各个步骤予以改进,摸索出各种优化方案。(一)样品前处理优化对传统方法中的样品处理过程进行改进,方案如下:采样一膜过滤一刮擦一隔夜浸泡一漩涡振荡一 2 次摇床洗脱一离心浓缩一洗涤沉淀一再次离心浓缩一 IMS(2 次酸解离) 一 IFA 镜检读数。该方法改进之处如下:1. 直接在洗脱基础上,增加了滤膜刮擦后隔夜浸泡和洗脱前剧烈振荡,提高回收率,且使回收率更稳定;2. 更换洗脱液,投加高岭土浊液,提高水样浊度至 4NTU;3. 离心浓缩后洗涤沉淀 2 次酸解离。通过以上改进步骤,缩短了反应混合时间,减少了两虫与磁珠结合体解离,最大限度保留两虫在终检物中的存在水平,使检测结果尽可能接近实际。(二)方法联用传统方法重现率差,关键限制步骤在漂浮处理,沉淀分离法重现率高于蔗糖漂浮分离法。通过沉降法与免疫磁分离法联用,改进浓缩步骤,提高了重现率。沉降法与免疫磁分离法联用重现率可达 %~ %,高于蔗糖漂浮法( 重现率为 %~ % )。且卵囊( 包囊) 预先染色允许精确估计峰浓度等于或低于背景水平的重现率,重现率在一定范围的生物固体中稳定,不受贮存保留时间的影响。(三)改进检测设备及检测步骤目前, 已知的 1622 和 1623 方法检测系统主要有: 方法、 浓缩法、-Max 系统。我国生活饮用水标准检验方法微生物指标中采用的是 Envirochek 浓缩分析方法和 Filta—Max 分析方法。 Filta-max 系统研发公司正在改进 Flita-max 的清洗程序和清洗台及颗粒浓缩设备的替代处理器。此系统产生的数据信息符合 1622 和 1623 标准,用 Stom-acher离心技术代替 Filta-max 洗提、浓缩可得到平行结果,避免清洁Filta-max 清洗台及流出装置,这对处理样本量大,寻求提高生产效率的实验室而言很有意义。Stom-acher 技术主要改进之处如下:1. 卵囊捕获和流出增加;2. 结合 IMS,特异性微生物浓缩,降低假阳性和非特异性干扰;3. 新增的染色步骤进一步有助于鉴定卵囊或包囊;Envirochek 方法中过滤系统可采用标准滤囊和高容量滤囊,高容量滤器是自然水检测较好的选择,过滤能力受温度变化的影响相对小。使用 Envirochek 过滤器进行的检测中,卵囊回收率高于ICRSS(信息收集法则补充调查),两种方法分别为 54%和 43%,而包囊回收率低于 ICRSS,两种方法分别为 25%和 53%。原因可能是使用的包囊原初始状态存在问题( 质量不好,在采集和处理过程中解体),也可能是所用的包囊株不同。浊度可解释孢囊回收率在不同点的差别,但不能解释卵囊回收率的差别。将 Filta—Max xpress 快速法的检测性能与 EPA 标准检测方法 1623 中的两种方法( 即 IDEXX 的 Filta—Max 系统和 PaII Gelman 的 EnvirochekTM HV 浓缩器)对不同环境水样加标样品的回收率