PDA培养基的配制方法.doc

一、目的要求
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二、培养基的配制原理
培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质,用以培养、分离、鉴定、
保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中,微生物种类繁多,营养类型多样,加上实训
和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,但不论是何种培养基,均应含有水分、碳源、
氮源、能源、无机盐等。不同微生物对pH值要求不一样,所以配制培养基时,还应根据不
同微生物对pH值的要求,将培养基调到合适的pH值范围。
三、实训材料和用具
琼脂,可溶性淀粉,葡萄糖, 10﹪NaOH,10﹪HCl,1mol/L NaOH,lmol/L HCl,KNO3,NaCl,K2HPO4·3H20,MgSO4·7H20,FeSO4·7H2O;试管,三角瓶,烧杯,量筒,玻璃棒,天平,牛角匙,PH试纸,棉花,牛皮纸,记号笔,纱布,
四、操作方法与步骤
(一) 培养基的配制
PDA培养基的配制其配方如下:土豆200g,葡萄糖20g,琼脂15~20g,水1000mL,pH值自然。
(1)称量和熬煮药品实际用量计算后,按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。
(2)加热溶解把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。
(3)分装按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
(4) 加棉塞培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。
(5)包扎加塞后,将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳或橡皮筋扎好,用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
(二) 棉塞的制作
棉塞的作用有二:一是防止杂菌污染;二是可过滤空气,保证通气良好,并可减缓培养基水分的蒸发,所以正确地制备棉塞是培养基制备中重要的一环。正确的棉塞是形状、大小,松紧应与试管口
(或三角烧瓶)完全适合。过紧则妨碍空气流通,操作不便;过松时,空气会毫无障碍地进入试管(或三角烧瓶)中,达不到灭菌的目的。棉塞过小往往易掉进试管内,因此棉塞质量的优劣对实训的结果有很大的影响。正确的棉塞头较大,加塞时,应使棉塞长度的1/3留在试管口外,2/3在试管口内(见实训图6-4)。目前,有条件的实训室已使用坚固的塑料试管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替代棉塞,制作棉塞要选纤维较长的棉花,一般不选用脱脂棉。因为它容易吸水变湿,造成污染,而且价格也贵。棉塞制作方法见图6-5
实图6-4棉塞实图6-5 棉塞的制作方法
(三)斜面与平板培养基的制作
斜面与平面培养基是常用的琼脂固体培养基。将熬制好的