小鼠 缺氧实验指导(2016).doc

【实验目的】
(低张性和血液性)缺氧动物模型复制的方法,了解缺氧的分类。
(活动状况、呼吸、粘膜及肝脏的颜色)及存活时间;
,理解条件因素在缺氧发病中的重要性。
。
。
【实验原理】
导致低张性缺氧最常见的原因包括吸入气氧分压过低和外呼吸功能障碍。本实验将小鼠放置于加入钠石灰的密闭广口瓶内,随着小鼠的呼吸消耗,广口瓶中氧气含量逐渐降低,模拟外环境氧分压过低引起的低张性缺氧。观察低张性缺氧时机体的变化(活动状况、呼吸、粘膜及肝脏的颜色)及存活时间。
影响机体对缺氧耐受性的因素很多,除缺氧时间、速度、类型和程度外,还与缺氧时中枢功能状态和年龄等因素有关。本实验通过应用药物改变小鼠的中枢兴奋状态及选择不同年龄的小鼠,观察不同条件下低张性缺氧小鼠的活动状况和存活时间。
血液性缺氧是由于血红蛋白的数量减少或性质改变从而降低血液携氧能力或血红蛋白结合的氧不易释出所引起的缺氧。本实验将复制两种常见血液性缺氧模型:一氧化碳中毒和亚***盐中毒引起的血液性缺氧。一氧化碳可与血红蛋白结合,形成碳氧血红蛋白而失去结合氧的能力,从而导致血液携氧能力降低而引起机体缺氧。亚***钠是强氧化剂,可使血红蛋白分子内二价Fe2+氧化成为三价Fe3+而形成高铁血红蛋白,高铁血红蛋白同样失去携氧能力而引起血液性缺氧。
【实验对象】
成年小鼠(性别、年龄、体重近似、雌雄不拘)、新生小鼠
【实验药品和器材】
%尼可刹米、%***丙嗪、生理盐水、钠石灰、5%亚***钠、1%亚甲兰、浓硫酸、草酸。
缺氧瓶带气压平衡装置、耗氧量测定装置(图1)、1 ml注射器、5 ml注射器、电子天平、纱布、滤纸、眼科剪、眼科镊、小烧杯、酒精灯、火柴、CO发生装置(图2)、气囊袋。

【实验步骤】
1. 低张性缺氧
(1)取体重接近的成年小鼠2只,称重后分别放入盛有钠石灰(大约4~5 g,以双层纱布包裹)的两个缺氧瓶(A瓶和B瓶)中,A瓶不盖胶塞,暴露于空气中,B瓶用胶塞塞紧瓶口。
(2)比较观察2只小鼠的活动状况、皮肤(口唇)黏膜和肝脏颜色、呼吸频率(次数/10 s)和深度,记录小鼠出现抽搐的时间及存活时间。
(3)通过耗氧量测定装置测量低张性缺氧(B瓶)的小鼠耗氧量。
(4)计算耗氧率(计算方法见附录)。
(5)当B瓶小鼠死亡后,将A瓶中小鼠断颈处死,解剖2只小鼠腹腔,取出小鼠肝脏组织,置于标记的白色滤纸上,比较观察肝脏的颜色。
2. 不同年龄对缺氧耐受性的影响
(1) 取成年小鼠和新生幼鼠各1只,将2只小鼠分别放入缺氧瓶内(每瓶均放置纱布包裹的钠石灰5 g),盖上胶塞。
(2) 观察小鼠的活动状况、皮肤(口唇)黏膜和肝脏颜色、呼吸频率(次数/10 s)和深度,记录小鼠出现抽搐的时间及存活时间。
表一、低张性缺氧各项指标变化及不同年龄对低张性缺氧耐受性的影响
分组
活动状况
黏膜颜色
呼吸
耗氧率
抽搐出现时间(s)
存活时间(s)
肝脏颜色
正常对照(A组)
低张性缺氧(B组)
新生幼鼠组
3. 不同中枢状态对缺氧耐受性的影响
(1) 取成年小鼠3只(A、B、C