氨基酸的薄层层析实验报告.doc

生物化学实验报告姓名:XXX学号:XXXXXX专业年级:临床八年制__组别:第二实验室实验名称(TitleofExperimetn)氨基酸的薄层层析实验日期(DateofExperiment)XX实验地点(LabNo.)第二实验室合作者(Partner)XXX指导老师(Instructor)XXXX总分(TotalScore)教师签名(Signature)批改日期(Date)一、。掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。掌握如何根据移动速率(Rf值)来鉴定被分离的物质(即氨基酸混合液)。:(是色谱分析技术的一种)一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相(展开溶剂)在固定相上流动时,由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样,不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样,点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同,因而可以彼此分开。(即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行,而将样品各组分分离开来)***的显色反应茚三***水化后生成的水合茚三***在加热时被还原,此产物与氨基酸加热分解产生的氨结合,以及另一分子水合茚三***缩合生成蓝紫色化合物而使氨基酸斑点显色。,物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。即:=由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的,故移动速率(Rf值)也是恒定的,因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。①丙氨酸:称取丙氨酸溶于90%异丙醇溶液至。②精氨酸:称取精氨酸溶于90%异丙醇溶液至。③甘氨酸:称取甘氨酸溶于90%异丙醇溶液至。④混合氨基酸溶液:将丙氨酸、精氨酸、甘氨酸按等体积制成混合溶液。(上述溶液已由老师提前制备完成)①吸附剂:硅胶G(.)。②粘合剂:羟***纤维素钠(a):取羟***纤维素钠溶于蒸馏水中,煮沸,静置冷却,弃沉淀,去上清备用。③展开溶剂:按80:10:10(V/V/V)混合正丁醇、冰醋酸及蒸馏水,临用前配制。④茚三***溶液:取茚三***(.)溶于无水***(.)至。⑤展层-显色剂:按照10:1比例(V/V)混合展开剂和茚三***溶液。①层析板(6cm15cm);②小烧杯;③量筒(10mL);④小尺子;⑤毛细玻璃管;⑥层析缸;⑦烤箱;⑧天平;⑨药匙。(1)制版①调浆:利用普通天平,粗称取3g硅胶,加入羟***纤维素钠,调成均匀的糊状②涂布:取洁净的干燥玻璃板③干燥:将玻璃板水平放置,,自然晾干④活化:70烘干30分钟。切断电源,待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。(2)点样①标记:用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相距1cm。②点样:用毛细管分别吸取氨基酸溶液,轻轻接触薄层表面点样。加样后原点扩散直径不超过2mm。自然晾干后,必要时可再重复点一次。(3)层析将薄层板点样端浸入展层-显色剂,展层-显色剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖,上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端2cm时,停止展层,(该实验中超过板长度的即可)取出薄板,用铅笔描出溶剂前沿界线。(4)显色放置在烤箱中用85℃下烘干,即可显出各层斑点。(5)数据处理利用小尺子,测量各氨基酸色斑中心至样品原点中心距离和溶液前缘至样品原点中心的距离。计算RF值,从而判断混合液的成分组成。①吸附剂:实际实验要求不高,学生不用考虑。②点样:点样的次数依照样品的溶液的浓度而定,样品量太少,有的成分不易显示;样品量太多,易造成斑点过大,互相交叉或拖尾。故:。③避免污染:切勿用手直接接触薄层板面,必要时戴上手套。二、:材料:3g的硅胶和羟***纤维素钠(实验室提供试剂,利用普通天平称取硅胶、a)并利用小烧杯混合搅拌均匀。实验时间:约20min实验技巧:将糊状物倒至洁净玻璃板正中间,形成连续的一条线,并马上开始左右来回晃荡,使糊状混合物向着玻璃板的两边蔓延。在边缘的地方利用晃荡和药匙凃均匀后,再晃荡几次,使得全部糊状物在玻璃板上均匀的形成涂层。实验失误:在实验中,第一次由于糊状物搅拌时间过久,变浓厚而不易使涂层变均匀,故导致制作的结果较差。:材料:上一次同学制作的层析板(根据后续实验可知该板的质量不高)、4瓶已经配制好的溶液(丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、前3种的任一比例混合物)、已经含有展层-显色剂的层析缸及烤箱等。实验时间:1h左右实验技巧:在点样过程中,必须垂直点样,使样液能充分被