氨基酸的薄层层析--实验报告.doc

氨基酸的薄层层析--实验报告生物化学实验报告姓名:学号:专业年级:组别:第四实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称氨基酸的薄层层析实验日期2015-11-09实验地点第四实验室合作者指导老师评分教师签名批改日期一、。,包括制板、点样、层析、显色。(Rf值)来鉴定被分离的物质(本实验中即氨基酸混合液)。二、:本实验将硅胶作为固相支持物,羧***纤维素钠作为黏合剂,两者的混合物作为固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相展开溶剂在固定相上流动时,由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样、不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样,点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同,通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行,混合液中的氨基酸可以彼此分开。:层析用硅胶是一种多孔性物质,它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基(-Si-OH),这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附。硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱,其吸附活性也与含水量呈负性相关,故涂布操作前必须保证平板足够干燥。硅醇基显较弱的酸性,因而,硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离,碱性成分不能用它分离,故混合氨基酸样品中的氨基酸组分均为中性或酸性氨基酸。硅胶的活化温度通常为105℃-110℃,不能过高,故活化过程中的烘干温度控制在70℃左右。:茚三***水化后生成水化茚三***,它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三***、氨基醛,与此同时,还原茚三***又与氨基茚三***缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。(氨基酸显色反应的化学方程式参见下图):层析中,物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的,故移动速率(Rf值)也是恒定的,因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。三、:(1)氨基酸标准溶液:,,(2)混合氨基酸溶液:,,:硅胶、%的羧***纤维素钠、展层-显色剂(正丁醇、乙酸、水、茚三***溶液):层析板、尺子、铅笔、药匙、玻璃棒、50ml小烧杯、10ml量筒、托盘天平、毛细玻璃管、层析缸、烘箱、::步骤操作(1):称取硅胶3克,%的羧***纤维素钠8毫升,调成均匀的糊状。:取洁净的干燥玻璃板均匀涂层。:将玻璃板水平放置,室温下30min自然晾干。:70℃烘干30分钟。(2):用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相距约1cm。:用毛细玻璃管分别吸取丙氨酸、精氨酸、甘氨酸及混合氨基酸溶液,轻轻接触薄层表面点样,重复滴两滴。加样后原点扩散直径不超过2mm。(3)对氨基酸样品进行层析将薄层板点样端浸入