氨基酸纸层析法实验报告.docx

氨基酸纸层析法实验报告化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告课程名称:生物化学实验项目:氨基酸的分离鉴定—纸层析法实验室名:生物化学实验室实验时间:XX-11-15任课老师: 专业班级:生物工程1142学生姓名:髙晔学号:XX组别:第五组注:1、报告内的项目或内容设置,可根据实际情况加以调整和补充。 2、学生提交实验报告时间为实验后10日内。姓名:郭沈杰年级专业:XX级生物科学同组者:蔡萍萍学号: 实验四氨基酸的纸层析法一、实验目的了解并掌握氨基酸纸层析法的原理和方法。二、实验原理以滤纸为支持物的层析法,称为纸层析法。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时,水为固定相,它与滤纸纤维亲和力强;有机溶剂为流动相,它与滤纸纤维亲和力弱。有机溶剂在滤纸上又下向上移动的,称为上行法;有上向下移动的,称为下行法。将样品在滤纸上确定的原点处展层,由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配,且他们的分离系数各不相同,所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同,于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来,形成距原点不等的层析点。在一定条件下,不同的氨基酸有固定的移动速率 Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离混合氨基酸做样品时,如果只用一种溶剂展层,由于某些氨基酸的移动速率相同或相近, 就不能将它们分开,为此,当用一种溶剂展层后,可将滤纸旋转90度,以第一次所的层析点为原点,在用另一溶剂展层,从而达到分离的目的。这种方法称为双向层析法。氨基酸无色,利用茚三***反应,可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。本实验主要介绍的是单向层析法。其中混合氨基酸有精氨酸、苯丙氨酸。三、实验仪器 1、新华滤纸2、层析缸3、细线4、点样管5、橡皮筋6、电吹风7、喷雾器8、铅笔9、直尺四、实验试剂 1、精氨酸、苯丙氨酸、混合氨基酸 2、展层剂:正丁醇:12%氨水:95%乙醇:蒸馏水=13:3:3:1 3、%茚三***—无水***溶液:茚三***溶于100ml无水***,贮于棕色瓶中五、实验步骤 1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张,在一端打孔,系一根细线,在另一端2~3cm处用铅笔画一横线,在上面相同间隔画3圆点。 2、取毛细管3支,分别吸取精氨酸、苯丙氨酸、氨基酸混合液少许,在原圈处点样,样点直径不宜超过5mm,每点一次用吹风机吹干,点2~3次为佳。 3、点样后将滤纸放入层析缸中展层,注意点样线要高于层析液面,滤纸不要贴在层析缸璧上,当展层至另一端1~2cm处时,停止展层。 4、取出滤纸,用铅笔记下溶剂前沿,然后用热风吹干烘干。5、均匀喷上茚三***—无水***液,注意使溶液不倒流,不间断。6、用吹风机吹干,观察层析点,确定其几何中心。 7、量取数值,计算各自的Rf值,与表中标准氨基酸Rf值比较,确定样品氨基酸种类。六、实验结果实验数据与表中标准氨基酸Rf值比较,可知混合氨基酸是1:1混合的谷氨酸和苯丙氨酸的混合物。原始数据七、实验分析 1、纸层析法是利用各种氨基酸在两相中不断进行分配,分离系数不同,导致氨基酸