血清谷丙转氨酶的测定实验报告.docx

血清谷丙转氨酶的测定实验报告实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定【目的和要求】了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义,学****转氨酶活力测定的原理和方法。【原理】生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶,能催化α-氨基酸的α-氨基与α-***基酸的α-***基互换,在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。转氨酶的最适pH接近,它的种类甚多,其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶和谷氨酸-***酸转氨酶的活力最强。它们催化的反应如下。正常人血清中只含有少量转氨酶。当发生肝炎,心肌梗死等病患时,血清中转氨酶活力常显著增加,所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。测定转氨酶活力的方法很多,本实验采用分光光度法。谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-***戊二酸后,生成的***酸与2,4-二硝基苯肼作用生成***酸2,4-二硝基苯腙。***酸2,4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色,可用分光光度法测定。从***酸2,4-二硝基苯腙的生成量,可计算酶的活力。【操作方法】 2,4-硝基苯肼可与有***基的化合物作用形成苯腙。底物中的α-***戊二酸与2,4-二硝基苯肼反应,生成α-***戊二酸苯腙。因此,在制作标准曲线时,须加入一定量的底物,以抵消由α-***戊二酸产生的消光影响。先将试管置于37℃恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。向各管内加入,4-二硝基苯肼溶液后再保温20min,最后,分别向各管内加入/L氢氧化钠溶液5ml。在室温下静置30min,以0号管作空白,测定520nm的光吸收值。用***酸的微摩尔数为横坐标,光吸收值为纵坐标,画出标准曲线。 :取2支试管并标号,用第1号试管做为未知管,第2号试管做为空白对照管。各加入谷丙转氨酶底物,置于37℃水浴内10min,使管内外温度平衡。取血清加到第1号试管内,继续保温60min。到60min时,向两支试管内各加入2,4-二硝基苯肼试剂,于37℃保温20min,然后再向2支管中加入/L氢氧化钠溶液5ml。在室温下静置30min后,测定未知管的520nm波长光吸收值。在标准曲线上查出***酸的微摩尔数。。计算每100ml血清中转氨酶的活力单位数。【试剂和器材】一`试剂 `器材 1./***酸钠标准溶液。取分析纯***酸钠11mg溶解于50ml磷酸缓冲液内[当日配制]。。取分析纯α-***戊二酸DL-丙氨酸克置于小烧杯内,加1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸调整pH至后,加磷酸缓冲液至100ml。然后加***仿数滴防腐。此溶液每毫升含α-***戊二酸μmol,丙氨酸200μmol。[在冰箱内可保存一周]。 ,4-二硝基苯肼溶液。在200ml锥形瓶内放入分析纯2,4-硝基苯肼,加100ml1mol/L盐酸。把锥形瓶放在暗处并不时摇动,待2,4-二硝基苯肼全部溶解后,滤入棕色玻璃瓶内置[冰箱内保存]。 5./L氢氧化钠溶液。[冰箱内保存] 实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定【目的和要求】了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义,学****转氨酶活力测定的原理和方法。【原理】生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶,能催化α-氨基酸的α-氨基与α-***基酸的α-***基互换,在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程