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Lowry法检测蛋白质的含量.doc

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Lowry法检测蛋白质的含量一、实验原理:首先在碱性条件下蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜复合物,该复合物加入酚试剂后产生蓝色复合物。该蓝色复合物在650nm处的吸光度值与蛋白质的含量成正比,根据供试品的吸光度,计算供试品的蛋白质含量。二、配液碱性酒石酸盐溶液:,,,加水至1L,溶解混匀。硫酸铜溶液:称取硫酸铜(CuSO4·5H2O),加水至200ml,溶解混匀。碱性铜溶液(现用现配):量取溶液A100ml,溶液B2ml,混匀即得。标准蛋白质储备液(1mg/ml):用纯化水将牛血清白蛋白对照品定量稀释至1mg/ml,混合均匀,,1ml/管,贴好标签,于-20℃或以下低温冰箱贮存。标准蛋白质工作液(100μg/ml):将标准蛋白质贮备液用前10倍稀释至100μg/ml。阳性对照(约50μg/ml的牛血清白蛋白溶液):精密称取牛血清白蛋白25mg,加纯化水溶解,加入500ml容量瓶中,定容至刻度,混合均匀,冷冻管分装,,贴好标签,于-20℃或以下低温冰箱贮存,有效期两年。三、步骤:(1mg/ml)稀释成100μg/ml的标准工作液。(双份)、、、、,分别加入刻度试管中,补水至1ml。(双份)于刻度试管中;。(溶液A100ml、溶液B2ml混匀),涡旋混匀,室温条件放置10分钟。(稀释至1N),摇匀,室温放置30分钟。,测定标准溶液的吸光度值,以及供试品和阳性对照的吸光度值。根据标准蛋白浓度和其对应吸光度的标准曲线,计算供试品和阳性对照的蛋白含量。

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Lowry氏法测定蛋白质含量

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