革兰氏染色法实验报告(共5篇).docx

革兰氏染色法实验报告(共5篇) 革兰氏染色法的原理及其练****摘要:革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征,所以学****微生物学,进行革兰氏染色实验是很重要的。为保证染色结果的正确性,采用规范的的染色操作方法是十分必要。本实验主要对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌进行革兰氏染色,观察它们的染色特征,辨别是革兰氏阴性还是阳性,从而掌握其染色方法。染色方法与过程很清晰,但实验结果中金黄色葡萄球菌(Rosenbach)多组呈现假阴性。本实验的主要目的是熟悉并掌握革兰氏染色方法及原理,但要想做出很好的染色得多加练****本实验还可以锻炼显微镜操作技术和无菌操作技术。关键词:革兰氏染色大肠杆菌()金黄色葡萄球菌()枯草杆菌() 引言革兰氏染色是微生物学中最重要的鉴别染色方法,它可以直接将细菌分为革兰氏阴性和革兰氏阳性。革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两种类型,这是由这两种细菌细胞壁结构组成与结构的差异所决定的。经过一定的染色过程后,革兰氏阳性的细菌会因为细胞壁肽聚糖的含量高,脂质含量低而保持第一次染色的蓝紫色。革兰氏阴性细菌细胞壁的脂质含量高,乙醇处理时脂质溶解,蓝色被洗脱,复染后变为红色。革兰氏染色原理很简单,染色时需注意要注意使用处在活跃生长期的细菌,涂片不宜过厚,严格控制脱色时间。大肠杆菌()是革兰氏阴性细菌,金黄色葡萄球菌()与枯草杆菌()都是革兰氏阳性细菌,染色后在显微镜下容易区别。同时它们的形态各异,可以根据具体颜色和形态差异来判断染色是否成功。本实验还涉及到高倍油镜的使用。使用油镜与用一般的镜头不同,具体使用在实验方法中描述。材料菌种大肠杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,金黄色葡萄球菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,枯草杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。溶液与试剂无菌生理盐水,草酸铵结晶紫染液,卢戈氏碘液,95%乙醇,番红复染夜,香柏油,二甲苯仪器酒精灯,载玻片,显微镜,双层瓶,接种环,滴管等方法制片:取活跃生长期菌种按常规方法涂片、干燥和固定。染色初染:滴加草酸结晶紫染液覆盖涂菌部位,染色2min,水洗至流出水无色。媒染:用卢戈氏染液冲去残留水迹,再用碘液覆盖1min,倾去碘液,水洗至流出水无色。脱色:将玻片上的水用吸水纸吸取,用滴管流加95%乙醇脱色,稍后立即洗去乙醇。复染:将玻片上的水用吸水纸吸去,用番红复染液染色2min,水洗,吸去残水烤干。镜检分别用香柏油覆盖涂菌部位,先用低倍镜找到菌,换用色情况。观察结束后,用二甲苯擦洗镜头。的物镜观察染 ,3个图片上都是红色,因此大肠杆菌应该是革兰氏阴性细菌,与事实相符,染色成功。金黄色葡萄球菌比较难染色,从结果中可以分析,前两个涂片的菌种可能培养的时间太长了。因为老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性,老龄的G+细菌细胞壁老化,不能在乙醇处理的时候使肽聚糖网孔收缩而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁,从而在复染时被染红。枯草杆菌染色结果很好,蓝紫色很明显,染色成功。小结 1、获得本实验成功的关键:固定时烘烤要适度,太轻会在冲洗时冲走细菌,过度会破坏细菌形态;脱色的时间要严格控制,脱色不够造成假阳性,脱色过度会出现假阴性;选用新培养的菌种,涂片时不能太厚。这些问题在实验过程中几乎都有出现,尤其是对于初学者,特别需要注意。 2、革兰氏染色可以迅速将细菌分为阴性和阳性,是很重要的染色方法,也是相当复杂的染色方法。通过练****革兰氏染色,既掌握了一般的染色方法,又为以后技术要求更高的染色,观察,鉴别奠定了基础。实验一:细菌、放线菌的形态观察与革兰氏染色姓名:陈虹邑学号:XX系别:生物科学与生物技术班级:周二第一组试验日期:XX年9月13日同组成员:邢悦婷呼波一、实验目的及意义1、巩固油镜的使用; 2、掌握细菌形态观察的基本方法;3、了解细菌的基本形态和结构。4、了解革兰氏染色的原理;5、初步掌握细菌涂片的方法;6、掌握革兰氏染色的方法;7、掌握放线菌的涂片方法; 8、观察基内菌丝、气生菌丝和孢子丝。二、实验材料与方法【实验材料】菌种:溶血链球菌(ushaemolyticus),螺菌(Spirillumsp.),巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium),苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis),普通变形菌(Proteusvulgaris),***丁酸梭菌(Clostridiumacetotylicum),褐球固氮菌(um)等细菌永久装片,放线菌5406,金黄色葡萄球菌,大肠杆菌试剂:香柏油、无菌水、结晶紫、番红或沙黄、95%酒精、碘液仪器及用具:显微镜、擦镜纸、吸水纸、小滴管,接种环、载玻片、盖玻片、酒精灯【实验方法】